Desarrollo de un sistema de PCR colorimétrico para la identificación y tipificación de papilomavirus humano oncogénicos

CHOUHY D; BENITEZ GIL L; NOCITO AL; CITTADINI J; GARDIOL D; GIRI AA

Rosario

Congreso; VI Congreso y XXIV Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario (SBR); 2004

Sociedad de Biología de Rosario

El cáncer cervical es una de las neoplasias más comunes que afecta los órganos reproductivos de la mujer. Mundialmente es el segundo cáncer más frecuente después del de mama y en Latinoamérica ocupa el primer lugar en incidencia. La infección con papilomavirus humano (HPV) de tipos oncogénicos es el evento clave en el desarrollo del cáncer cervical en humanos. La prevención del cáncer cervical se basa en la realización periódica del Papanicolaou (Pap), el que ha contribuido notablemente a reducir la incidencia de cáncer cervical. Sin embargo, se siguen registrando casos de neoplasias cervicales en mujeres controladas periódicamente con el Pap, lo que indicaría que se llegado al límite de sensibilidad de esta metodología para la detección precoz de esta neoplasia. Dada la indiscutible asociación del cáncer cervical con los HPV oncogénicos, disponer de un ensayo molecular para la detección de estos tipos virales facilitaría el diagnóstico precoz del cáncer cervical. En este trabajo presentamos el desarrollo del L1HPVPCR, un ensayo basado en la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) con revelado colorimétrico para la detección de HPV mucosotrópicos y tipificación de los HPV oncogénicos de mayor incidencia (HPV-16, -18, -31, -33 y -35). Se optimizó la técnica de PCR utilizando los cebadores degenerados MY11 y MY09 biotinilado. Los productos amplificados fueron analizados mediante detección colorimétrica en microplaca. El L1HPVPCR optimizado resultó ser reproducible, sensible (1x10-3 copias de HPV/célula), de fácil ejecución y de bajo costo. Para convalidar la aplicabilidad de la técnica para el diagnóstico se analizaron 73 muestras de cepillado cervical. El ADN viral fue encontrado en el 64% (47/73) de éstas y tipificado en el 53% (25/47). Estos resultados, comparados con los datos provenientes del Pap, indican al L1HPVPCR como un sistema de mayor sensibilidad para la detección precoz del cáncer cervical. Teniendo en cuenta la falta de accesibilidad a los sistemas comerciales, disponer de un ensayo molecular desarrollado en la región aseguraría tanto la calidad como la continuidad de los resultados, permitiendo un seguimiento más eficiente de las pacientes a riesgo de desarrollar cáncer cervical.