LA ELECTROFORESIS CAPILAR APLICADA AL CONTROL DE CALIDAD DE IDEBENONA EN

CONTIN MARIO; BUONTEMPO FABIAN; GARCIA BECERRA CRISTIAN; LUCANGIOLI SILVIA; TRIPODI VALERIA

Congreso; 1er Congreso Argentina de técnicas cromatográficas y afines (CACTA); 2013

INTRODUCCION La Idebenona es una benzoquinona sintética análoga de la Coenzima Q10 (CoQ10) que actúa como carrier en la generación de ATP en el transporte de electrones mitocondrial.Ambas quinonas poseen una forma reducida y oxidada compartiendo el mismo anilloquinónico, responsable de su acción. Sin embargo, la Idebenona posee una cadenamas corta permitiéndole una rápida difusión a través de las membranas biológicas. La Idebenona se utiliza en desordenes neurológicos como la ataxia de Friedreich,neuropatía hereditaria de Leber, encefalomiopatías mitocondriales y demencia senil.En el campo farmacéutico se han reportado métodos para el análisis de Idebenona total (oxidada + reducida) utilizando HPLC, UV y TLC. En las últimas décadas la electroforesis capilar (EC) con sus diferentes modos de operación se ha posicionado gracias a su gran eficiencia, cortos tiempos de análisis,reducidos volúmenes de muestra y reactivos, y la posibilidad de analizar un amplio rango de compuestos como una alternativa a las metodologías tradicionales. El objetivo de este trabajo es desarrollar por primera vez un método analítico sencillo por EC para el control de calidad de Idebenona en formulaciones pediátricas. MATERIALES Y METODOS Los análisis por EC se llevaron a cabo en un P/ACE ? MDQ capillary electrophoresis system (Beckman, Fullerton, CA, USA). Se utilizó un capilar de sílica de 50 cm totales (40 cm hasta el detector) y 75 μm de diámetro interno. La obtención de Idebenona reducida (IdebenonaH2) se realizó a partir de Idebenona oxidada utilizando Borohidruro de sodio (BH4Na) como agente reductor. Las formulaciones pediátricas a analizar consistían en suspensiones de Idebenona en ORAPLUS? con esencia de naranja y TPGS o Tween 80 como agente humectante. Experimental:Se optimizaron las condiciones de corrida, incluyendo: fuerza iónica, % de solvente orgánico y % de solvente en la inyección. Se estudió la separación entre Idebenona e IdebenonaH2, la selectividad frente a degradados en diferentes condiciones de estrés, y se realizó una completa validación del método incluyendo linealidad, precisión, límite de detección, límite de cuantificación, recuperación y robustez. RESULTADOS Las condiciones de corrida finales que permiten una adecuada separación de Idebenona reducida y oxidada consistieron en un sistema constituido por micelas de SDS como fase pseudoestacionaria en una solución de borato y tetrahidrofurano (THF) como solvente orgánico. El THF no solo permitió obtener una buena resolución entre Idebenona e IdebenonaH2, sino incrementar la ventana de elución. De esta manera se logró separar la ambos estados redox de Idebenona del marcador del tiempo de migración de la micela. Se observo que la Idebenona sometida a condiciones de estrés en medio básico o ácido, se degrada completamente, sin observarse picos que puedan interferir con la identificación de la misma, mientras que se produce una degradación parcial al ser expuesta a la luz. No parece ser afectada en condiciones de oxidación. La precisión en el dia (n=6) y entre días (n=12), arrojo un RSD menor a 2.0, mientras que en la linealidad se obtuvo un r2 de 0.992. La exactitud fue realizada en términos de recuperación con un 80, 100 y 120 % de la concentración de Idebenona en la formulación pediátrica. Los valores de recuperación se encuentran entre 99.3 y 100.5, con un RSD en todos los casos menor a 1.8. El estudio de robustez se llevo a cabo siguiendo un diagrama de Plackett-Burman. Los siete parámetros evaluados fueron: voltaje, temperatura de corrida, % de etanol en la inyección, concentración de THF, concentración de borato, longitud de onda, tiempo de purga previa a la corrida. Se evaluó la resolución, factor de asimetría, número de platos teóricos y factor de retención demostrando que dichos parámetros no se modificaron significativamente concluyendo que el método es robusto. Como prueba de aplicabilidad, se determinó la concentración de Idebenona en dos tipos de formulaciones pediátricas y el control de la ausencia de su forma reducida. Los valores obtenidos (50.3 y 50.9 mg mL-1 ), coincidieron con los valores nominales (50 mg mL-1 ) y se verificó la ausencia de IdebenonaH2 analizada como posible impureza. CONCLUSION EL método propuesto resulto sencillo, rápido y robusto, siendo adecuado para el control de calidad de Idebenona en formulaciones pediátricas. El método resulta una alternativa válida a las metodologías tradicionales, con las ventajas del bajo consumo de muestra, solventes, y un corto tiempo de análisis.