MODIFICACION DE LA FLOCULACION DE Kloeckera apiculata mc1 POR VARIACIONES NUTRICIONALES.

MARTA ELENA FARIAS; OSCAR ANTONIO SOSA; MARIA CRISTINA MANCA DE NADRA

TUCUMAN

Congreso; XIX JORNADAS CIENTIFICAS DE LA ASOCIACIÓN DE BIOLOGIA DE TUCUMAN; 2002

La floculación describe la propiedad expresada por ciertas levaduras de agregar espontáneamente formando flóculos que sedimentan en el cultivo. Este fenómeno tiene interés comercial en bebidas fermentadas principalmente como método económico de separación de células del medio al final del proceso de fermentación. En nuestro laboratorio determinamos que Kloeckera apiculata mc1 aislada de vino argentino posee un fenotipo floculante cuyo mecanismo es mediado por interacción proteína carbohidrato, estabilizada por iones calcio. El objetivo de este trabajo es determinar las variaciones en el grado de floculación de la levadura, modificando las condiciones nutricionales del cultivo. Se utilizan tres medios de cultivo: YMPG (extracto de levadura, 10 g/l; extracto de malta 5 g/l; peptona, 20 g/l y glucosa, 20 g/l; pH 5,5); Sabouraud (peptona 10 g/l y glucosa, 40 g/l, pH 5,5) y medio jugo de uva (extracto de levadura, 10 g/l; tween 80, 1 ml/l y jugo de uva comercial, 57 ml/l; pH 5,5). Se incuba a 30°C y las células se tratan con buffer defloculante (50 mM Na3PO4 – 50 mm EDTA pH 7.5) y floculan nuevamente en buffer acetato 50 mM pH 4,5 adicionado de iones Ca2+ (50 mM). El grado de floculación (DF) se determina resuspendiendo las células por agitación y midiendo la densidad óptica a 620 nm, inmediatamente (D0) y después de 10 minutos (D1). La relación R = D1 x 100/D0 representa el porcentaje de células en suspensión. Los valores de DF (5, 4, 3, 2, 1 y 0) están inversamente relacionados a R (0, 0-10, 10-30, 30-65, 65-90 y 100). La hidrofobicidad de la superficie celular se determina por la adhesión microbiana a hidrocarburos (MATH). En el medio rico YMPG, Kloeckera apiculata presenta una intensa floculación (DF=4), con rápidosedimento de los flóculos en el fondo del tubo. El porcentaje de células resuspendidas es mayor (DF=3) cuando la levadura desarrolla en medio Sabouraud y en el medio jugo de uva, la floculación es muy débil (DF=1). Las diferencias en hidrofobicidad, no son significativas en los diferentes medios de cultivo (10, 23 y 17% en medio YMPG, Sabouraud y jugo de uva, respectivamente). Para determinar la directa influencia de los componentes del medio, las levaduras floculadas en el medio más rico se defloculan con el buffer de defloculación y se someten al tratamiento con el mismo medio y con sus componentes. Las células resuspendidas en el medio fresco vuelven a flocular con DF=4. Cuando el medio se diluye 2 o 4 veces el grado de floculación disminuye a DF=3 y 2 respectivamente. El agregado de Ca2+ 2 o 10 mM al medio fresco, incrementa la floculación (DF=5). Cuando las células defloculadas se someten al tratamiento con 20 g/l de peptona, 8% queda en suspensión (DF=4). A menores concentraciones de peptona, 2 o 5 g/l , el porcentaje de células resuspendidas incrementa a 15 y 13 %, respectivamente. Resultados similares se obtienen cuando a las células se someten a tratamiento con extracto de malta. Diferentes concentraciones de extracto de levadura no afectan el grado de floculación. Los resultados indican que la floculación de Kloeckera apiculata mc1 es más efectiva en medios ricos. En el medio jugo de uva, la floculación es mínima y está en relación al requerimiento de peptona o extracto de malta, que actúan como inductores para la floculación de esta levadura. En base a lo expuesto, el fenotipo floculante de Kloeckera apiculata mc1 tendría similitud con el fenotipo New flo de Saccharomyces cerevisiae.