Búsqueda de integrones de clase I en aislamientos clinicos de Enterococcus spp. y Staphylococcus aureus

FERNANDEZ, A.; DI CONZA, J.; MASSA, R.; GARDELLA, N.; DI GREGORIO, S.; FERNANDEZ, S.; MOLLERACH, M.; GUTKIND, G.

Congreso; VII Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas; 2012

Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas

ObjetivoLa presencia de integrones ha sido ampliamente descripta en bacterias gram negativas; sin embargo, son aún escasos los reportes de su presencia en gram positivos, en nuestro país. Hasta el momento algunas de las especies descriptas a partir de aislamientos clínicos en China y Colombia, han sido S. aureus, S. epidermidis, E. faecalis y E. faecium. Debido a que los integrones de clase 1 son los más frecuentemente hallados a partir de aislamientos clínicos, el objetivo del siguiente estudio consiste en detectar la presencia de integrones de clase 1 en aislamientos de Enterococcus spp. y S. aureusprovenientes tanto de la comunidad como de hospitales de la Argentina.   Materiales y Métodos:Se analizaron 163 aislamientos de los géneros Enterococcus yStaphylococcus, recuperados en las provincias de Bs. As., Santa Fe y Misiones (2004-2011). Los aislamientos de enterococos, incluyeron 16 E. faecium,  4 E. raffinosus y 20 E. faecalis, siendo 28 de las 40 cepas resistentes a vancomicina. Dentro de los aislamientos de estafilococos, todos ellos S. aureus, 55 correspondían a portadores, 58 se recuperaron a partir de infecciones asociadas a la comunidad y 10 a partir de infecciones intrahospitalarias.  En el 97,6% de las cepas de S. aureus había sido detectado el gen mecA, asociado al casete SCCmec de tipo IV en 109 de los 120aislamientos.El ADN extraído se sembró en una membrana de nylon y se analizó con sonda de ADN para integrasas de clase 1 (intI1), a partir de un fragmento previamente purificado, secuenciado y marcado con fosfatasa alcalina del kit Amersham Gene Images AlkPhos Direct Labelling and Detection System. Además de los ADN muestra se incluyeron controles negativos y positivos para intI1; los controles negativos consistieron en ADN extraído a partir de cepas de M. morganii PP07 y E. coli XL1Blue, mientras que los controles positivos fueron extraídos a partir de cepas de Salmonella Infantis S21, C. freundii 14 y K. pneumoniae 22K portadoras de plásmidos de resistencia. Como control de la presencia de ADN en todas las muestras, las membranas se deshibridaron y rehibridaron con sonda de ADN 16S.   ResultadosEl 100% las cepas de cocos gram positivos analizadas resultaron negativas para la presencia del gen de integrasa clase 1. En todos los controles positivos se detectó la señal quimioluminiscente, la cual estuvo ausente en los controles negativos, al hibridar con sonda intI1. Hibridó en todos los casos la sonda de ADN 16S. Ambos controles indicaron el correcto funcionamiento de la técnica de hibridación con sonda y la presencia de ADN en todas las muestras.  ConclusiónNinguno de los microorganismos analizados portan la integrasa de clase 1 en su ADN lo cual nos indica, al menos, la baja diseminación de dicha plataforma de reclutamiento en bacterias gram positivas en nuestro país. Será necesario continuar analizando un mayor número de aislamientos para detectar de manera temprana la aparición de integrones de resistencia en gram positivos, incluyendo la búsqueda de integrones de clase 2 y 3, a fin de poder analizar las resistencias asociadas e implementar esquemas de tratamiento adecuados para prevenir o disminuir su diseminación a futuro.