INVESTIGADORES
ROSLI Hernan Guillermo
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización de la actividad beta-xilosidasa durante la maduración de frutilla
Autor/es:
BUSTAMANTE, CLAUDIA ANABEL; ROSLI, HERNÁN GUILLERMO; CIVELLO, PEDRO MARCOS; MARTÍNEZ, GUSTAVO ADOLFO
Lugar:
Santa Rosa, La Pampa
Reunión:
Congreso; XXV Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2004
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal
Resumen:
Durante la maduración de los frutos carnosos se producen una serie de cambios fisicoquímicos, entre los que se destaca un ablandamiento progresivo. Precisamente, las principales causas de este ablandamiento son los cambios y la degradación de los diferentes componentes de la pared celular. La xilosa es un componente abundante de la pared celular vegetal, formando parte de las pectinas y hemicelulosas. Las hemicelulosas están compuestas principalmente por xiloglucanos y xilanos. Los xiloglucanos probablemente son degradados por endoglucanasas, mientras que los xilanos son degradados por la acción de endo beta-1,4 xilanasa, que hidroliza los enlaces beta-1,4 entre xilosas para producir xilooligosacáridos. Estos íltimos serían degradados por  beta-xilosidasa generando una liberación de xilosa. Trabajos previos realizados en nuestro laboratorio permitieron obtener un fragmento de ADNc (denominado FAXyL1) que codifica para una beta-xilosidasa. Utilizando como sonda un fragmento de FAXyL1 marcado con 32P-dATP se inició la búsqueda del ADNc complento en una biblioteca de ADNc de frutos maduros. Como resultado de la misma se obtuvo un clon 700 pb más largo a partir del extremo 5´. Se midió la actividad beta-xilosidasa en distintas variedades de frutilla y se observó que la misma es mayor en la variedad más blanda. Para estudiar los niveles de proteína, se clonó un fragmento de FAXyL1 en el vector de expresión pET24a. La proteína sobreexpresada se purificó a partir de cuerpos de inclusión y se utilizó para generar anticuerpos específicos en conejo. El análisis por Western blot permitió detectar la presencia de 3 bandas, las cuales podrían corresponder a diferentes isoenzimas. Una de ellas se mantendría constante a lo largo de la maduración. Las otras serian inducidas en los estadios más avanzados de la maduración, siendo sus niveles mayores en la variedad más blanda.