CARACTERIZACIÓN ANTIGÉNICA DE LAS PROTEÍNAS MASPs DE Trypanosoma cruzi

LA SPINA PE; DURANTE I; CARMONA SJ; AGÜERO F; A BUSCAGLIA, CARLOS

Santa Fe

Congreso; XXVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias y SIMPOSIO Internacional de Biología Celular y Molecular de la Enfermedad de Chagas; 2016

Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias (SAP)

Con el objeto de descubrir y caracterizar nuevosantígenos de T. cruzi, sintetizamos microarreglospeptídicos de alta densidad, cuya reactividad fueevaluada frente a sueros de pacientes. Entre lasmoléculas incluidas, unas 250 pertenecen a lafamilia multigénica de las MASPs (?MucinAssociated Surface Proteins?), que participan enla adhesión e invasión de T. cruzi en células demamífero y están siendo exploradas comoposibles antígenos vacunales. Algunas de lasMASPs bajo estudio mostraron reactividadvariable, aunque siempre restringida a la regióncentral hipervariable compuesta por distintosfragmentos de secuencia que se distribuyen ycombinan en forma de mosaico entre genesparálogos. Las regiones N- y C-terminalesconservadas, codificantes para señalessecretorias presuntamente clivadas en lasproteínas maduras, no presentaron reactividad.Los 83 peptidos inmunoreactivos de MASPs seagruparon en 35 grupos utilizando criteriosestructurales. Para cada uno de estos grupos seidentificaron y mapearon in silico los motivosantigénicos. Para los 7 más antigénicos serealizaron alineamientos y se compararon contralas secuencias sin reactividad del microarreglo,encontrándose secuencias de aminoácidosmínimas que caracterizan a cada motivo. Utilizando éstos motivos mínimos, se identificarona las MASPs parálogas que los contienen,encontrándose que cada uno posee un patrónconservado de localización relativa. Además seestudió la distribución de los motivos mássalientes del análisis entre las MASPs. Paravalidar estos resultados se amplificaron por PCRlos péptidos antigénicos de MASPs específicasrepresentantes de los distintos motivos, los cualesse clonaron y expresaron como proteínas defusión a GST. El potencial diagnóstico de estosantígenos se evaluó mediante ELISA, utilizandoestas proteínas recombinantes y un amplio panelde sueros Chagásicos y controles. Uno de losepitopes (de secuencia QQQSDEAQFQQ) mostróuna sensibilidad del 54% y una especificidad del100% y otro (de secuencia LQVAGIKTTTATTGDSobtenido como péptido) 81% y 98%respectivamente. Se analizaron MASPs queposeían más de un motivo obteniéndose un 50%de sensibilidad y 100% de especificidad. El restode los grupos presentó sensibilidades menores al15%. Se encontró en general, que los datospreliminares presentados hasta ahora tienen unabuena correlación con los del microarreglo.