Generación de ESTs (Expressed Sequence Tags) de Triatoma infestans.

MORETTI G, TEKIEL V, NICOSIA S, AGÜERO F, LAMMEL EM, ISOLA ELD, SANTINI MS, RONDEROS JR, RIVERA POMAR R, SANCHEZ DO.

Chascomús, Buenos Aires, Argentina

Congreso; XXII Reunión Anual, Sociedad Argentina de Protozoología; 2007

Sociedad Argentina de Protozoología

Triatoma infestans es uno de los vectores más importantes de Trypanosoma cruzi en Argentina y en gran parte de América del Sur. Con el objetivo de contribuir a la generación del transcriptoma de este insecto estamos realizado la construcción de diferentes bibliotecas de cDNA para la secuenciación de ESTs. Hasta el presente contamos con dos bibliotecas. Una construida usando el kit de Clontech "SMART cDNA library Construction Kit" a partir de mRNA extraído de insectos enteros del IV estadio de desarrollo. La segunda biblioteca fue construida a partir de mRNA aislado de intestino de insectos infectados con Trypanosoma cruzi substraída con RNA obtenido de intestino de vinchucas no infectadas. La construcción de esta biblioteca se realizó con el kit "PCR-Select cDNA Subtraction" de acuerdo al protocolo de la técnica de supresión de hibridación substractiva provisto por el fabricante (Clontech). Para la secuenciación parcial de los clones se amplificaron los insertos mediante "colony PCR", se trataron con Exo-SAPit (USB) y secuenciaron en un equipo ABI3130 (Applied Biosystems). Hasta el presente hemos secuenciado alrededor de 500 clones de la primer biblioteca y más de 150 de la segunda. Análisis de los ESTs obtenidos se presentará en el poster.