Informe tecnico de avance 1 PICT2021-0119 salto institucional

PUNTEL, MARIANA; GERMAN, LORENA; BOUZAT, CECILIA

2022-10-03/2023-10-02

Biológica

Enf.Endemicas-Enf.infecciosas respirat.

El objetivo general del proyecto es desarrollar una plataforma para la identificación de potenciales agentes terapéuticos para el tratamiento de la retinitis neurodegenerativa de etiología viral con especial foco en los virus influenza H1N1 y SARSCov2.Para ello no planteamos primero equipar el área de virología del INIBIBB, consolidar el área de virología para la generación y caracterización de stocks virales, la incorporación de la tecnología de pseudovirus, y la generación de vectores de expresión de genes de interés.OE1. Establecer los modelos de degeneración del EPR in vitro por la infección con influenza virus H1N1, o Pseudovirus SARSCov2 (PVS-S1).1.1 Generación y caracterización del pseudovirus, PSV-1, de stock viral H1N1, H1N1ma, y stock de E13. (1er trimestre)1.2. Células D407 deprivados de suero durante 18 h serán infectadas con diferentes cantidades de virus (moi=1, moi=2, moi=5), y a diferentes tiempos post-infección (p.i.). (1er, 2do 3er trimestres)OE2. Establecer los modelos de degeneración de la retina in vivo por la infección con virus influenza H1N1, o Pseudovirus SARSCov2. (Según protocolo CICUAE 189/2022 y 195/2022).Sistema influenza H1N1. Puesta a punto de la infección ocular. Ratones Balb/c hembra de 6 a 8 semanas de edad, serán inoculados ocularmente con el virus influenza H1N1. (2do y 3er trimestre)Sistema PSV-S1. Ratones C57BL/6 serán inoculados ocularmente con el PSV-S1 proveniente de la variante beta B1.351, altamente infecciosa en ratones.(3er y 4to trimestre)OE3. Identificar los candidatos terapéuticos en los sistemas in vitro de células epiteliales de la retina infectadas con influenza virus H1N1, o Pseudovirus SARSCov2.3.1. Células D407 infectadas con H1N1 en la moi efectiva, se tratarán con 0.08uM de E13, a las 12, 24, o 48 horas post-infección y se analizara entre las 8-24hs post-tratamiento. Se seleccionará el tiempo de tratamiento efectivo con E13 para el subsiguiente tratamiento con agonistas de RXR. Se analizará la expresión de marcadores de selección primaria según OE1. (2do y 3er trimestre)3.2. Células D407 infectadas con H1N1 en la condición de moi y tiempo de infección efectiva, se tratarán con 0.08uM de E13 en el tiempo de tratamiento efectivo seleccionado y se tratarán o no, con los agonistas de los RXR HX630 y bexaroteno, y se analizara entre las 8-24hs post-tratamiento, según la metodología descrita. Se analizará la expresión de marcadores de selección primaria según OE1. (2do y 3er trimestre)3.3. Células D407 infectadas con PSV-S1 en la condición de moi y tiempo de infección efectiva, se tratarán o no, con los agonistas de los RXR HX630 y bexaroteno, y se analizara entre las 8-24hs post-tratamiento, según la metodología descrita. Se analizará la expresión de marcadores de selección primaria según OE1. (3er y 4to trimestre)OE4. Caracterizar los candidatos terapéuticos en los sistemas in vivo de degeneración retiniana inducida por infección con influenza virus H1N1, o Pseudovirus SARSCov2. (Según protocolos CICUAE 190/2022, 193/2022, 194/2022, 196/2022).Sistema influenza H1N1. Tratamiento con nanoanticuerpo E13 administrado por vía ocular, a ratones infectados con virus H1N1ma con y sin tratamiento intravítreo con agonistas de los RXR. Análisis de marcadores de selección secundaria. (5to, 6to, 7mo trimestre)Sistema PSV-S1. Tratamiento con agonistas de los RXR administrado por vía intravítrea, a ratones infectados con PSV-S1. Análisis de marcadores de selección secundaria. (6to, 7mo, 8vo trimestre)