Performance aerodinámica y estabilidad de una formulación nebulizada de plasma hiperinmune de llama conteniendo anticuerpos anti-influenza tipo A H1N1.

CESCHAN, N.E.; VIVIANA PARREÑO; ANDRES WIGDOROVITZ; RAMIREZ-RIGO M.V.; PUNTEL M.

Buenos Aires

Congreso; Congreso y Exposición para la Ciencia y Tecnología Farmaceutica, Biotecnológica y Veterinaria; 2021

ETIF_Pharma

La inmunoterapia pasiva utilizando plasma/suero hiperinmune se utilizada para el tratamiento de infecciones virales de las vías respiratorias. Su administración local permite acceso al sitio de infección y el empleo de dosis menores a las requeridas por vía sistémica, por lo que constituye una potencial solución para disminuir el riesgo sanitario de individuos que se encuentran inmunológicamente expuestos.Uno de los sistemas de administración inhalatoria disponible y ampliamente usado es la nebulización, cuya principal ventaja radica en permitir la evaluación de nuevas formulaciones en pacientes de todas las edades, sin la necesidad de desarrollar tecnologías complejas. La calidad del aerosol generado, en estrecha relación con su capacidad de depositarse en el pulmón, depende de la formulación y de la tecnología usada para nebulizar. En trabajos anteriores hemos caracterizado el suero hiperinmune de llama inmunizada con vacuna comercial de influenza H1N1. Se observaron niveles significativos tanto de anticuerpos totales, como específicos para la proteína mayoritaria de la envoltura viral hemaglutinina (HA), así como anticuerpos neutralizantes de la infección viral (VN).El objetivo del presente trabajo fue estudiar el comportamiento aerodinámico y estabilidad del plasma hiperinmune de llama, nebulizado en un dispositivo tipo jet. Para ello, 1mL de plasma se colocó en la ampolla de un nebulizador jet disponible en el mercado argentino y se llevó a 4mL con buffer fosfato pH 7,4. La ampolla de nebulización se conectó a un equipo de impacto en cascada multietapa. El nebulizador y la bomba de vacío del impactador se dejaron correr durante 15 minutos, duración estándar de la dosificación utilizando sistemas nebulizados. El plasma depositado en cada parte del impactador y la ampolla, se recuperó con buffer fosfato pH 7,4 y se cuantificó mediante espectrofotometría UV-visible (280 nm). Adicionalmente se estudió la estabilidad del suero en las muestras colectadas, mediante ensayos de inmuno-detección en fase líquida (ELISA).Se identificó que más del 40% del suero cargado en la ampolla presentó una fracción fina de partículas menor a 5m (tamaño aerodinámico requerido para acceder al árbol respiratorio). Además, la mediana en masa del diámetro aerodinámico de la formulación resultó de 2,53m y GSD de 2,03, indicando una distribución de tamaño aerodinámico angosta. Los parámetros evaluados indican una adecuada aerosolización y deposición del aerosol en un sistema in vitro. Mediante ensayos ELISA de HA se demostró que la estabilidad del suero no se ve comprometida durante la nebulización. Se observo la capacidad de reconocimiento específico para los antígenos de interés, al mismo tiempo que se comprobó la integridad de la porción Fc de las IgGs detectadas. En síntesis, el sistema formulación-nebulizador presentó parámetros aerodinámicos adecuados para el tratamiento/profilaxis de la infección por H1N1 utilizando un nebulizador comercial. Además, la integridad de los anticuerpos contenidos en el plasma hiperinmune no se afectó durante el proceso de nebulización. Estos auspiciosos resultados motivan una caracterización exhaustiva del sistema mediante ensayos cualitativos, que permitan estudiar potencial degradación de moléculas, y cuantitativos, para determinar la performance aerodinámica en términos de anticuerpos con capacidad neutralizante de la infección viral.