Capacidad neutralizante contra la cepa H1N1 PR8m de nanoanticuerpos HA0 específicos.

SOSA HOLT, CARLA; BAZTARRICA J.; BARBIERI E.; ASENZO G; IBAÑEZ I.; BAUMEISTER E.; WIGDOROVITZ A.; VIVIANA, PARREÑO; PUNTEL M.

Buenos Aires

Congreso; Congreso Argentino de Virología; 2017

Sociedad Argentina de Virologia

El virus Influenza tipo A posee genoma ARN de 8 segmentos y pertenece a la familia Orthomyxoviridae. Los fenómenos de cambios genéticos y reasociación de los genomas segmentados generan la necesidad de complementar la formulación de las vacunas con terapias neutralizantes. Los nano-anticuerpos (VHHs) son moléculas derivadas de anticuerpos presentes en llamas monoclonales y debajo peso molecular (15kDa), alta afinidad, especificidad, estabilidad y solubilidad, por lo que se presentan como herramientas atractivas para su administración en tratamientos de inmunidad pasiva. Previamente hemos descripto clones de VHHs seleccionados específicos contra la proteína recombinante HA0 de la cepa viral H1N1 A/Puerto Rico/8/1934 (PR8) y también reconocen específicamente un aislamiento argentino de la cepa pandémica (H1N1 A/Argentina/017/2009) (H1N1Pdm). En el presente trabajo presentamos la capacidad neutralizante observada in vivo de los clones G41.2 y E13.2 frente al desafío viral en el modelo ratón. Se utilizó la cepa de referencia de tipo A murinizada (A/H1N1 Puerto Rico/8/1934, PR8m), dosis 2DL50/50ul administrada por vía intranasal (in). Se introdujeron dos grupos control: CNeg de animales tratados con PBS e infectados con virus PR8m, y CPos de animales tratados con un suero policlonal de ratón inmunizado con H1N1Pdm. El ensayo de neutralización profiláctica se realizó mediante la administración in de VHHs, 4hs antes de la infección viral: G41.2 100ug y G41.2 200ug; y E13.2 100ug, E13.2 50ug y E13.2 25ug (en 50ul de PBS-1% BSA) (n=5). Se realizó el seguimiento de peso de los animales desafiados durante 14 días; tanto como el análisis de título viral infeccioso en homogenato de tejido pulmonar, 4 días post- infección (dpi). Los resultados observados indican una reducción en el título infeccioso en los animales tratados con VHHs respecto de los controles de PBS que se condice con la disminución de peso observada: grupos E13.2 100ug y E13.2 50ug con títulos virales menores a 1UHA/ml; grupos tratados con suero hiperinmune de ratón, G41.2 100ug y G41.2 200ug mostraron títulos virales mayores a 3UHA/ml; y el grupo CNeg mostro títulos mayores a 6UHA/ml. Los resultados presentados reforzarían la caracterización bioquímica y funcional de los clones E13.2 y G41.2 anteriormente presentada en cuanto al epitope blanco de interacción. Por un lado, E13.2 mostro capacidad neutralizante frente a H1N1 PR8m aun utilizando 50ug de VHH, además de neutralizar a H1N1Pdm lo que se trataría de un anticuerpo neutralizante dirigido al tallo de la proteína HA0. Por otro lado, G41.2 no logro neutralizar a PR8m mientras que si a H1N1Pdm, y logra inhibir la hemaglutinación; por lo que estaría interactuando con la cabeza de la HA0. Pese a haber sido inicialmente seleccionado con HA0 de PR8 recombinante el epitope especifico se habría perdido en el proceso de murinizacion de la cepa. Este último punto será confirmado por comparación de secuencias entre HA0 recombinante y HA0 encontrada en la cepa PR8m.