Nanoanticuerpos contra la proteína HA del Virus de Influenza A H1N1 con capacidad neutralizante

BAZTARRICA J.; SOSA HOLT, CARLA; PUNTEL M.; BARBIERI E.; GARAICOECHEA L.; BAUMEISTER E.; WIGDOROVITZ A.; PARRENO V.

Buenos Aires

Congreso; Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Virologia; 2016

Asociación Argentina de Microbiologia

Titulo del trabajo:Nanoanticuerpos contra la proteína HA del Virus de Influenza A H1N1 con capacidad neutralizante Autores:Sosa Holt, C (1); Puntel, M. (1,3,4); Baztarrica, J(1); Barbieri, E(1,3): Garaicoechea, L(1,3); Baumeister, E(2); Wigdorovitz, A(1,3); Parreño, V(1,3,4).Filiaciones:(1) Instituto de Virología, INTA Castelar, Argentina; (2) Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas ANLIS, Malbran, Argentina; (3) CONICET; (4) Universidad de Morón.Area:Antivirales, inmunidad y vacunasCuerpo del resumen:La inmunidad pasiva ha sido históricamente una estrategia de elección en la lucha contra infecciones con virus influenza. A pesar de que muchas cepas de virus influenza no replican o causan enfermedad en ratones algunas cepas virus de influenza humanos han sido adaptados al ratón a través de pasaje seriado. El modelo ratón resulta una herramienta atractiva y útil para el estudio de la eficacia de tratamientos antivirales y vacunas contra influenza entre otros agentes. Nuestro grupo ha informado anteriormente el desarrollo de nanoanticuerpos (VHH) específicos contra la proteína HA0 de la cepa H1N1. Se observó que 5 de los 37 anticuerpos que demostraron especificidad para H1N1 poseen actividad neutralizante in vitro frente a la cepa H1N1 A/Argentina/017/2009. Por otro lado, el clon G41.2 inhibe la hemoaglutinación por esta misma cepa. Tanto el clon G41.2 como el clon E13.2 demostraron tener actividad neutralizante con muy alta afinidad: 0.025ng/pocillo fueron suficientes para mostrar actividad neutralizante del virus sobre monocapas celulares de MDCK, versus 1.5 o 3ng necesarios para obtener el mismo resultado con otros clones.En el presente trabajo presentamos la capacidad neutralizante observada de los clones G41.2 y E13-2. Brevemente, se realizó un ensayo de protección profiláctica realizado en el modelo ratón donde los VHHs fueron administrados por vía intranasal (100ug en 50ul de PBS). Como control negativo se utilizó un VHH no relacionado. Como control positivo se utilizó suero de ratón inmunizado con la cepa de desafío H1N1 A/Argentina/017/2009, de acuerdo a la dilución estipulada como neutralizante mediante ensayos realizados .La capacidad neutralizante frente a la infección viral otorgada por cada tratamiento fue evaluada a punto final: 4 días post-tratamiento y desafío. Se analizó el titulo viral infeccioso obtenido a partir del lisado de tejido pulmonar de los ratones analizados, sobre células MDCK y revelado por ELISA con un suero policlonal de cobayo A/Argentina/017/2009.A partir de dos ensayos independientes, se observaron títulos virales menores a 10 TCID50/ml para los grupos tratados con G41.2, E13.2, y el suero especifico de ratón; mientras que se detectaron títulos menores a 10e5TCID50/ml con el VHH no relacionado, y menores que 10e7TCID50/ml, en macerado de pulmón . Estos resultados indicarían una fuerte eficacia en la neutralización viral< in vivo> de los VHHs estudiados, y sugerirían que podrían ser utilizados en tratamientos profilácticos específicos como complemento de las terapias ya existente. Debemos resaltar que estos resultados son preliminares dado que en el presente modelo no obtuvimos pérdida de peso debida a la infección, lo cual indicaría la baja virulencia de la cepa en ratón. Los pasos a seguir involucrarían pasajes seriados de la cepa, con el objeto de obtener su ¨murinización¨. Asimismo, sería necesario probar la capacidad neutralizante de estos VHHs en un modelo animal de infección por contagio como lo son los cobayos.