Caracterización de nanoanticuerpos contra la proteína HA del Virus de Influenza A H1N1

BAZTARRICA J.; BARBIERI E.; GARAICOECHEA L.; PUNTEL M.; BAUMEISTER E.; WIGDOROVITZ A.; PARRENO V.

Congreso; Congreso Argentino de Virologia; 2015

Sociedad Argentina de Microbiologia

Influenza tipo A es un virus de la familia Orthomyxoviridae de genoma a ARN, de 8 segmentos. Debido al rápido cambio genético y reasociación del genoma viral segmentado, las cepas virales evolucionan continuamente y se hace necesaria la actualización de la formulación de las vacunas para la producción. En la Argentina, la pandemia H1N1 del año 2009 generó 1.390.566 personas infectadas y 617 muertes reportadas. A pesar de la disponibilidad de vacunas y drogas anti-virales, los efectos profilácticos y terapéuticos permanecen incompletos. Esto se debe, en parte, al tiempo transcurrido entre que se detecta una cepa emergente y se produce una vacuna eficaz frente a dicha cepa. Esto impide contar con las herramientas para una protección inmediata para su aplicación en pacientes de alto riesgo, es por esto que en este trabajo estamos presentando la posibilidad de utilizar nano-anticuerpos contra una región conservada de la hemaglutinina del Virus. Los nano-anticuerpos (VHHs) son moléculas de un solo dominio, derivadas de anticuerpos de tamaño (15kD) presente en la naturaleza capaz de reconocer a un antígeno y son de muy alta afinidad, especificidad, estabilidad, y solubilidad. Debido a la carencia de la porción Fc típicamente encontrada en las inmunoglobulinas, estos anticuerpos no desencadenan respuestas celulares tóxicas o mediadas por complemento. Además, su pequeño tamaño y similitud con las inmunoglobulinas humanas los hace poco reactivos y aptos para su administración en la mucosa del tracto respiratorio.En el laboratorio de INCUINTA se han generado VHHs a partir de la inmunización de una llama con una vacuna trivalente conteniendo cepas de influenza tipo A H1N1, H3N2, y una cepa de tipo B. Por biopaneo, se seleccionaron 37 clones de VHHs, de los cuales 22 reconocen por ELISA de fagos a la proteína recombinante HA0 de la cepa viral H1N1 A/Puerto Rico 1934 y 15 reconocen al virus correspondiente a un aislamiento argentino (H1N1 A/Argentina/017/2009). La caracterización por secuenciación de los clones determinó que tres de los VHH (A5A.1, D81.1, D91.2) poseerían un doble puente disulfuro en el domino CDR3, lo cual redundaría en una mayor estabilidad de los mismos. Asimismo, se observó que 5 de los 37 anticuerpos poseen actividad neutralizante in vitro frente a la cepa A/Argentina/017/2009.Por otro lado, el clon G41.2 inhibe la hemoaglutinación por esta misma cepa.Los resultados mencionados indican que cinco clones son candidatos para su utilización tanto en la profilaxis y tratamiento de la infección, para lo cual se realizará la evaluación in vivo en un modelo murino, como también para el desarrollo de un kit diagnóstico.