ESTUDIO IN VITRO DE LA RESPUESTA INMUNE INNATA EN CÉLULAS BOVINAS INFECTADAS CON STAPHYLOCOCCUS AUREUS EN MODOS DE VIDA LIBRE Y EN BIOPELÍCULA

BOHL LP; SANTONI LN; ISAAC P; BRESER ML; CONESA A; ORELLANO MS; CORREA SG; TOLOSA DE TALAMONI NG; PORPORATTO C

Jornada; XI Jornadas y Reunión Anual de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria (AAIV); 2018

La mastitis bovina es la inflamación de la glándula mamaria, principalmente como consecuencia de una infección bacteriana. Esta patología presenta alta incidencia en todo el mundo, siendo difícil de controlar y regenerando importantes pérdidas económicas para el sector lácteo. La formación de biopelículas (o biofilm) se considera una ventaja selectiva para los patógenos y ha sido asociada con la persistencia bacteriana en la ubre, la recurrencia de la enfermedad, el aumento de la resistencia a los antimicrobianos y la evasión a la respuesta inmune del huésped. Este modo de crecimiento de la bacteria ha cambiado la forma en que se estudian las interacciones entre los patógenos y las células huésped en el laboratorio. Por ello, el objetivo de este trabajo fue estudiar la respuesta inmune innata in vitro de células bovinas infectadas con Staphylococcus aureus en modos de vida libre (planctónico) y en biofilm. Se utilizó la cepa formadora de biofilm S. aureus V329 (aislada de mastitis subclínica), una mutante biofilm negativa (S. aureus V329 Δbap Δica) y las líneas celulares bovinas MAC-T (epiteliales de glándula mamaria) y BoMac (macrófagos). En primer lugar, se determinó la invasión bacteriana mediante el ensayo de exclusión con gentamicina, implementando tres metodologías experimentales que difieren en el modo de representar las biopelículas. Luego, se eligió una de las metodologías y se aplicó para el estudio de la expresión del receptor de reconocimiento tipo Toll (TLR) 2 por citometría de flujo, la producción de citoquinas IL1β e IL6 mediante ELISA y la expresión génica de IL1β, IL6, IL8, TNFα y NFkB por retrotranscripción seguida de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real. El análisis estadístico de los datos se realizó con test t, ANOVA o Kruskal Wallis (*p