Metilaciones no-CpGs son requeridas para la delimitación del borde de la placa neural en vertebrados

VÁZQUEZ, NICOLÁS A.; STROBL MAZZULLA, P.H.

Taller; IV Taller de Biología Celular y del Desarrollo; 2018

El borde de laplaca neural (BPN) incluye a un grupo de progenitores  embrionario, estrechamente delimitado por laplaca neural (PN) y la epidermis, en donde se inducen y luego especifican las células de la cresta neural (CCN). Si bien los progenitores que contribuyen a BPN, laPN y la epidermis tienen un mismo origen embriológico, el ectodermo, son pocoslos estudios que demuestran molecularmente como se establecen sus límites territoriales.En este sentido, nosotros identificamos un mecanismo epigenético-microARN capazde regular espacio-temporalmente la expresión de uno de los principalesfactores de transcripción involucrados en la especificación de los progenitoresdel BPN. El gen Prdm1 es uno de los primeros genes en expresarse en el BPN y esrequerido para la posterior activación Tfap2a, considerado como el gen maestrode la especificación de las CCN. Mediante análisis in silicoencontramos que las regiones 3?UTRs de Prdm1 y Tfap2a tienen sitios de unión parael miR-137. Nuestros estudios de expresión mediante hibridización in situ enembriones de pollo mostraron una clara exclusión territorial entre los tejidos endonde se expresan Prdm1 y Tfap2A (NPB) y el miR-137 (PN), demostrando unaposible relación funcional. Experimentos invivo de pérdida y ganancia de función de miR-137 mostraron un aumento ydisminución en la expresión de Prdm1, respectivamente, mientras que en el casode Tfap2a no se observaron efectos aparentes. Es sabido que la expresión de miR-137 está reguladaen diversos tipos de células tumorales mediante metilación del ADN en susregiones regulatorias. Sin embargo, nuestro análisis mediante secuenciación por bisulfito no mostródiferencias aparentes en la abundancia de metilaciones CpGs en el promotor demiR-137 entre muestras del BPN y PN. Interesantemente, pudimos determinar unamayor abundancia en las metilaciones de tipo no-CpGs (principalmente CpA y CpT) en el BPN respecto a loobservado en la PN. Tomados en conjunto nuestros resultados demuestran demanera in vivo que metilaciones de ADN no canónicas serían las encargadas deregular la expresión de microARNs claves en la delimitación espacial delterritorio neural y del borde de la placa neural en vertebrados.