INMOVILIZACION DE LACTATO OXIDASA EN GELES DE LAPONITA ESTABILIZADA CON UN POLICATION SILASESQUIOXANO

VERÓNICA PAZ; VELIA SOLÍS; BEATRIZ LÓPEZ DE MISHIMA; PIERRE LABBÉ

Termas de Rio Hondo, Santiago del Estero

Congreso; XIV Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inorgánica; 2005

Universidad Nacional de Santiago del Estero

La determinación de lactato en muestras biológicas y de alimentos es sumamente importante debido a la función de este analito tanto como metabolito en sangre como en aspecto de la calidad de los alimentos. Los biosensores enzimáticos han demostrado ser dispositivos altamente específicos para estos fines, siempre que se superen los aspectos relacionados con la sensibilidad y la estabilidad de la enzima. La Lactato Oxidasa cataliza la oxidación de lactato a piruvato con consumo de O2 y  producción de O2H2 y ha sido ampliamente utilizada en biosensores de lactato. Un aspecto fundamental en el diseño de los biosensores enzimáticos es la inmovilización de la enzima. Las arcillas, dada su naturaleza hidrofílica, permiten el atrapamiento de macromoléculas  biológicas mediante la adsorción de una mezcla acuosa de la enzima y la arcilla sobre la superficie de un transductor. En el presente trabajo la Lactato Oxidasa se inmoviliza sobre carbono vítreo en un gel que resulta de la mezcla de una arcilla sintética, la laponita, completamente delaminada y oligómeros de un silasesquioxano policatiónico, el cual estabiliza electrostáticamente a la arcilla. La laponita en dispersión acuosa se encuentra como cristales circulares planos cargados negativamente en las caras y positivamente en los bordes. El octámero se sintetiza a partir de un monómero precusor previo a la preparación de los geles. La cantidad de octámero incorporada excede a la capacidad de intercambio catiónico de la laponita, resultando en el gel un exceso de carga positiva, en el cual se inmoviliza la enzima cargada negativamente, a un pH mayor que su punto isoeléctrico. Se establecen las mejores condiciones de inmovilización y se analiza la respuesta del electrodo por voltametría cíclica y cronoamperometría, en presencia de ferrocén metanol como mediador artificial. Se determinan los parámetros cinéticos de la enzima bajo condiciones de control por el mediador y por el sustrato, también se determinan los parámetros analíticos del electrodo frente a la cuantificación de lactato. Se comparan las respuestas con las obtenidas para glucosa bajo condiciones similares condiciones similares