Herramientas de tipificación molecular de poblaciones naturales de T .cruzi en muestras pertenecientes al ciclo doméstico en argentina y al ciclo silvestre en brasil

CURA C; BISIO M; BURGOS JM; BRUSES B; LEJONA S; RIOBO P; ANCHART E; DIP G; GURGEL GONÇALVES R;

Santa Fe, Argentina

Congreso; XXIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Protozoologia; 2009

Sociedad Argentina de Protozoologia

T. cruzi se agrupa en 2 linajes principales: T. cruzi I y T. cruzi II, Tc I presenta al menos 5 haplotipos Ia-e en base a un motivo de microsatélite en el espaciador intergénico del miniexón (EIMx); y Tc II, 5 sublinajes IIa-e en base a diferentes marcadores isoenzimáticos y moleculares. Tc IIb/d/e ha sido relacionado mayormente al ciclo doméstico de transmisión; Tc IIa/c, al ciclo silvestre, y Tc I, a ambos. Estas poblaciones podrían jugar un rol importante en el tropismo tisular y en la patogénesis de la enfermedad de Chagas. Este estudio aplicó estrategias de PCR para tipificar poblaciones de T. cruzi directamente a partir de muestras biológicas. Se analizaron muestras sanguíneas de pacientes provenientes de zona endémica (Chaco: poblaciones Pilagás, Tobas y criollas; Formosa y Santiago del Estero) y residentes en zona no endémica (Ciudades de Buenos Aires, Rosario, Concordia y Corrientes, incluyendo inmigrantes nacidos en Bolivia y Paraguay) de la Argentina. Asimismo, se analizaron muestras de tejido intestinal, heces/orina de triatómicos silvestres y cultivo de parásitos aislados de los insectos, fijados directamente en papel de filtro (Rhodnius sp encontrados en palmeras de Brasil Central y de la región Amazónica, Triatoma sp y Panstrongylus megistus). El linaje se determinó de acuerdo al algoritmo publicado en Burgos y col, Int. J. Parasitol. 2007 (37(12):1319-27) y en el caso de Tc I por secuenciación del EIMx (Cura y col, SAP 2008, 2009). De las 186 muestras clínicas que resultaron T. cruzi positivas por PCR de kDNA, 65 % fueron Tc IIb/d/e y 1.1% Tc I. Dentro del grupo IIb/d/e se evidenció un claro predominio del linaje IId (76 %), mientras que los genotipos IIb/e y posibles poblaciones mixtas IId + IIb/e representaron un 3,3 %. Debido al bajo nivel de parasitemia en la fase crónica de la infección, no fue posible tipificar 34 % de las muestras kDNA positivas. De las 76 muestras de triatominos, 34 resultaron kDNA positivas. Se descartó la presencia de inhibidores de PCR por amplificación de 5 fg de DNA de T. cruzi agregados al extracto de muestras kDNA negativas. Se determinó el linaje de 3 muestras, obteniéndose Tc I, haplotipo Id y una población mixta Tc I + Tc IIb/d/e. Estos resultados concuerdan con trabajos anteriores que encuentran a Tc IId como población sanguínea prevalente en infección humana del cono sur, y a Tc I en el ciclo silvestre en Brasil, y demuestran la utilidad de estas estrategias para detectar poblaciones mixtas, que suelen estar enmascaradas al tipificar linajes en aislamientos de cultivo.