Diversidad de poblaciones de Trypanosoma cruzi en la infección humana

JUAN M. BURGOS

La Plata

Congreso; III Congreso Panamericano de Zoonosis, VIII Congreso Argentino de Zoonosis; 2014

Asociación Argentina de Zoonosis

INTRODUCCION Trypanosoma cruzi, agente etiológico de la enfermedad de Chagas, es una especie conformada por una población biológicamente heterogénea. La complejidad poblacional se ve reflejada en la diversidad de hospederos con los que interactúa, en los distintos vectores que lo transmiten y en los diversos ciclos de transmisión. Se han observado parásitos con diferentes capacidades infectivas, virulencia, antigenicidad, resistencia a drogas y tropismo tisular, fenómenos que han sido descriptos tanto en el modelo murino como en la infección en el hombre. Esta variabilidad también se ve reflejada en las diversas evoluciones clínicas que toma la infección. Mientras el 65-70% de los infectados permanece en la fase asintomática, el 30-35% evoluciona con desarrollo de cardiopatía y/o megavísceras (27% y 6%, respectivamente) característicos de la enfermedad de Chagas. La incidencia de estas manifestaciones, a su vez, presenta una distribución geográfica diferencial a lo largo del continente. Por otra parte, la variabilidad genética de la especie ha sido observada mediante diversos métodos desde los años ?70s. Actualmente, en base a marcadores génicos, enzimáticos e inmunológicos, y a datos provenientes de la secuenciación de diferentes stocks, se reconocen 6 grupos o Unidades Discretas de Tipificación de T. cruzi (UDT I ? VI). Sin embargo, la búsqueda de la relación entre dichos grupos parasitarios con los diferentes comportamientos de la especie y las patologías antes mencionadas es un desafío que aún se mantiene vigente para los investigadores del área. Este estudio involucra pacientes seropositivos para T. cruzi con inmunosupresión postrasplante cardíaco. Estos pacientes tienen favorecida la reactivación de infecciones preexistentes con manifestaciones, en el caso de T. cruzi, de incremento de la parasitemia y la colonización parasitaria de tejidos cardíaco y/o epitelial (chagoma). Este resumen presenta el estudio de las poblaciones parasitarias halladas en sangre y tejidos (cardíaco y epitelial) de este grupo de pacientes. La caracterización se realizó antes del trasplante y durante el seguimiento postrasplante, incluso después del tratamiento parasiticida que recibieron aquellos pacientes que sufrieron reactivación de la infección.   PACIENTES Y METODOLOGÍA             Se presenta el estudio de 16 pacientes trasplantados cardíacos seropositivos para la infección por T. cruzi; 11 de ellos sometidos a trasplante por cardiopatías de etiología chagásica y 5 debido a otras etiologías. Los pacientes entraron al protocolo días antes del trasplante y fueron seguidos hasta 2 años postrasplante. De ellos se tomaron muestras sanguíneas, biopsias de los corazones explantados e implantados y  muestras epiteliales, a diferentes tiempos, para comparar las poblaciones parasitarias en ellas presentes. Seis sufrieron reactivación de la infección chagásica y fueron tratados con benznidazol. Las poblaciones parasitarias fueron estudiadas antes y después del trasplante, y después del tratamiento en los casos donde este se administró.             Determinación de las UDTs parasitarias: las extracciones de ADN se realizaron a partir de muestras sanguíneas (mediante protocolos con fenol-cloroformo) y de las biopsias (mediante kit de extracción de ADN QIAGen). Sobre las muestras de ADN se realizó la determinación de la/las UDTs parasitarias mediante la amplificación por PCR de tres secuencias polimórficas para las diferentes UDTs. Se utilizaron las secuencias i) intergénicas del miniexón, ii) la región polimórfica de la subunidad 24S ribosomal y iii) el fragmento A10. Análisis de las poblacionales parasitarias a nivel infra-UDT: sobre las mismas extracciones de ADN se amplificó el fragmento hipervariable de 330pb del minicírculo del kinetoplasto (kDNA) y se lo digirió en dos dobles digestiones (AluI-HinfI, RsaI-MspI, PCR-RFLP kDNA). La comparación de los perfiles de digestión (por electroforesis en gel de poliacrilamida) permitió comparar las poblaciones parasitarias, dentro de una misma UDT, halladas en los distintos tejidos o a los distintos tiempos de seguimiento.   RESULTADOS             El estudio de las poblaciones parasitarias mostró en diferentes pacientes la presencia de UDTs I (subgrupo ?a? y ?d?) en sangre, parásitos I, II/V/VI en los corazones explantados, chagomas epiteliales formados por parásitos I, V/VI y parásitos UDT V y VI en biopsias endomiocárdicas. Cuatro pacientes presentaron infecciones por más de un UDT. Muestras tomadas en diferentes regiones del explante cardíaco presentaron poblaciones parasitarias diferentes. El tratamiento de los 6 pacientes que presentaron reactivación generó un descenso de la parasitemia hasta niveles indetectables. Un paciente presentó una segunda reactivación, generada por la misma población parasitaria,  1 año después de finalizado el tratamiento.   CONCLUSIONES En este estudio se detectaron infecciones multiclonales producidas por diferentes poblaciones parasitarias de distintas UDTs; infecciones multiclonales de una única UDT; histotropismo clonal en la infección humana; y resistencia al tratamiento de una población de T. cruzi específica. Los estudios realizados sobre pacientes con inmunosupresión abren un escenario que permite una mejor observación de la complejidad de las infecciones naturales por T. cruzi, permitiendo una mejor búsqueda de la relación entre las características genéticas del parásito con su participación y comportamiento en la infección.