Clonado y expresión de dos nucleasas tipo TatD de Trypanosoma cruzi, posibles factores de virulencia parasitario

SOFÏA DRAGO; MARÍA SUSANA LEGUIZAMÓN; JUAN M. BURGOS

Mendoza

Congreso; XI Congreso Sociedad Argentina de Protozoología; 2022

La producción y liberación al medio de proteínas con actividad nucleasa ha sido asociada a la virulencia de diversos microorganismos, tanto procariotas como eucariotas. Entre otras funciones, estas enzimas son responsables de facilitar la liberación de los patógenos de las NETs (Neutrophic Extracellular Traps). En relación a Trypanosoma cruzi, hemos descripto la liberación al medio de al menos dos proteínas con actividad nucleasa dependiente de Mg2+ por parte de tripomastigotes y amastigotes de cepas de alta virulencia, como CL Brener, que no son detectadas en aislamientos de baja virulencia. En este trabajo presentamos el clonado y la expresión de las nucleasas TatD05 y TatD15 de CL Brener. Estas proteínas han sido descriptas recientemente como factores de virulencia en tripanosomas africanos. Las mismas son producidas y liberadas al medio y poseen características de tamaño y actividad similares a las halladas por nosotros en T. cruzi. El clonado y secuenciación de TatD05 y TatD15 de CL Brener presentó homologías del 68 y 67% con respecto a las proteínas ortólogas de T. brucei, respectivamente. Además, en sus secuencias confirmamos la presencia de dominios TIM de unión a ADN, y de una región proteica propia de tripanosomatideos, ausente en las TatD de E. coli. La producción de las proteínas recombinantes se realizó en el sistema pTrcHis y expresión en E. coli BL21 codon plus. La correcta expresión se comprobó mediante SDS-PAGE y Western blot.