Búsqueda de inhibidores de los sistemas de resistencia bla y VraSRT de Staphylococcus aureus usando compuestos secretados por cepas de Streptomyces

ANTINORI, MELISA; FABBRI, CAROLINA; BERCOVICH, BARBARA A.; GRAMAJO, HUGO; RODRÍGUEZ, EDUARDO J.; LLARRULL, LETICIA I.

Rosario

Jornada; Primeras Jornadas de Ciencia y Tecnología de la FBIOyF, UNR; 2021

Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas, Universidad Nacional de Rosario (UNR)

Introducción:S. aureus resistente a meticilina (MRSA, por las siglas en inglés) se destaca como un importante patógeno humano y es considerado por la Organización Mundial de la Salud como una de las amenazas clínicas con multi-resistencias más importantes a nivel mundial. El principal mecanismo de resistencia a los antibióticos b-lactámicos en S. aureus se debe a la expresión inducible de la serin-b-lactamasa PC1, y de la transpeptidasa PBP2a, con afinidad reducida por estos antibióticos. Estos determinantes de resistencia están codificados en los operones bla y mec, respectivamente, y su expresión es regulada por las proteínas BlaR1/BlaI y MecR1/MecR2/MecI, respectivamente. Algunas cepas de S. aureus, además, presentan susceptibilidad disminuida a glicopéptidos, antibióticos de último recurso para el tratamiento de infecciones por MRSA. Este efecto se debe a la acción del sistema VraSRT, que detecta rápidamente el daño en la pared celular y coordina una respuesta integral permitiendo la sobrevida de la bacteria. Resultados:En el laboratorio contamos con cepas reporteras de S. aureus, en las cuales el gen gfp se encuentra regulado por los sistemas VraSRT o bla. Frente a concentraciones crecientes de antibiótico inductor, los sistemas se activan resultando en la producción de GFP y, consecuentemente, en un aumento en la intensidad de la fluorescencia emitida. Monitoreando la intensidad de fluorescencia de GFP y la densidad óptica seleccionamos entre 40 cepas de Streptomyces aquellas que secretan compuestos capaces de impedir la activación de los sistemas VraSRT y bla, sin influir en el crecimiento de las cepas reporteras. En una última instancia, evaluamos el efecto en cepas clínicas con resistencia intermedia a vancomicina (VISA y hVISA). Para esto realizamos ensayos de difusión en agar y curvas de crecimiento evaluando el potencial de estos compuestos en combinación con los antibióticos actualmente disponibles para restaurar la efectividad de los antimicrobianos. Actualmente, trabajamos en identificar el principio activo y corroborar que la inhibición sea específica para los sistemas VraSRT o bla.Conclusiones:Hemos construido cepas reporteras de los sistemas bla y VraSRT útiles para la identificación de compuestos activadores o inhibidores de estos sistemas. Hemos identificado cepas de Streptomyces que producen compuestos capaces de inhibir los sistemas en estudio y que restablecen la eficacia de los antibióticos β-lactámicos y/o glicopéptidos al ser ensayados con cepas resistentes de S. aureus.