Caracterización de genotipos de tomate (Lycopersicon esculentum) por los perfiles proteicos de pericarpio

SEQUIN, LUCIANA; RODRÍGUEZ, GUSTAVO RUBÉN; PRATTA, GUILLERMO RAUL; ZORZOLI, ROXANA; PICARDI, LILIANA AMELIA

Rosario, Santa Fe, Argentina

Congreso; XXIII Reunión anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2003

Sociedad de Biología de Rosario

Los perfiles proteicos proveen información sobre la constitución genética de un individuo y su expresión. El objetivo del trabajo fue caracterizar distintos genotipos de tomate por medio de perfiles de proteína del pericarpio. Los genotipos utilizados fueron el cv. Caimanta (C) y una variedad homocigota para el gen nor (non ripening) que prolonga la vida poscosecha del fruto (N) de L. esculentum var. esculentum, la entrada LA1385 de L. esculentum var. cerasiforme (Ce) que es el antecesor silvestre del tomate cultivado conocido como cherry, los híbridos F1 (C x N), F1 (N x Ce) y F1 (C x Ce) y dos híbridos comerciales “Dominic” (de larga vida poscosecha) (D) y “Bambino” (cherry) (B). Se cosecharon de cada genotipo frutos al estado pintón, definido cuando la superficie vira del color inmaduro al color de madurez. Las proteínas se extrajeron de 1,5 g de pericarpio homogeneizado con mortero en N2 líquido. El homogeneizado fue mezclado en presencia de 1,5 ml de buffer de extracción (100 mM Tris/HCl pH 8,0, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF, 2 % de b - mercaptoetanol) y 6 ml de fenol saturado con Tris buffer 100 mM (pH 8,0). Luego fue centrifugado  a 4200 rpm durante 10 minutos a 4 ºC. La fase fenólica fue removida, extraída nuevamente con un volumen de buffer acuoso y mezclada con 4 volúmenes de acetato de amonio en metanol (0,1 M). Las muestras se incubaron a -20 ºC durante la noche. Las proteínas fueron precipitadas por centrifugación a 4200 rpm durante 15 minutos a 4º C. El pellet se lavó dos veces con acetato de amonio en metanol (0,1 M) y una vez con acetona al 80 % y se resuspendió en buffer de siembra (25 mM Tris pH 6,8, 1 % SDS, 10 % glicerol, 5 % de b - mercaptoetanol y 0,002 % bromofenol blue). Igual cantidad de proteína (30 mg, cuantificada por la técnica de Bradford) fue sembrada en cada línea del gel. Las proteínas fueron separadas usando un gel de poliacrilamida a una concentración de 12 % en condiciones desnaturalizantes y la electroforesis se realizó a potencia constante (35 mA) durante 2 horas. La tinción se realizó por Coomasie Brillant Blue. El número total de bandas detectadas fue de 17, de las cuales 4 (24 %) resultaron polimórficas entre los genotipos. Este polimorfismo se detectó en una banda correspondiente a una proteína de 115 kDa que estuvo presente en N, C, D y la F1 (N x Ce) y ausente en los demás genotipos. Otra proteína de 32 kDa estuvo sólo presente en Ce, B y las F1 (C x Ce) y F1 (C x N). Para estas bandas la F1 (C x N) fue diferente a sus progenitores, mientras que las F1 (N x Ce) y F1 (C x Ce) presentaron un patrón proteico igual a N y Ce respectivamente. El patrón proteico de la F1 (N x Ce) se diferenció del resto porque fue el único que presentó una banda polimórfica de 48 kDa, mientras que una banda de 89 kDa estuvo ausente. Los genotipos cherry (Ce y B) se diferenciaron en sus perfiles proteicos de los genotipos de L. esculentum var. esculentum (C, N y D).