Análisis de la expresión de la proteína prostaglandina-endoperóxido sintasa 2 (PTGS2) en cultivos infectados con virus Junín”

GRAVANO MARIA BELÉN ; CECILIA VAZQUEZ; CORDO S

Cordoba

Congreso; XXXIV Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Virología.; 2022

Sociedad Argentiina de Virología

La prostaglandina-endoperóxido sintasa 2 (PTGS2) es una proteína deexpresión inducible, clave en la biosíntesis de acido araquidónico yprostaglandinas y responsable de la activación de vías inflamatorias yanti-apoptóticas. Virus como hepatitis C, hepatitis B, dengue y SARS-CoV-2 regulan la expresión de PTGS2. En estos casos el aumento deexpresión contribuiría tanto a la replicación como a la patogénesisviral. Para los arenavirus un único trabajo reportó la regulaciónnegativa de esta enzima por la cepa virulenta LCMV-WE. Mientras quela cepa no virulenta LCMV-Arm indujo la expresión de PTGS2. Sin embargo el estudio del rol de PTGS2 en la replicación de los arenavirus no ha sido abordado hasta el momento.El objetivo de este trabajo fue determinar si la infección con elarenavirus Junín (JUNV) produce un cambio en la expresión dePTGS2. Se utilizaron cultivoss humanos de la línea celularhumana A549 infectados a una m.o.i=0.1. Se analizó porinmunofluorescencia indirecta la expresión de PTGS2 a distintostiempos p.i. y en comparación con cultivos sin infectar. Secuantificó el número de células infectadas y el número de célulasexpresando PTGS2. A las 5 h p.i. el número de células PTGS2 (+)fue del 6%, alcanzando valores del 22% a las 24h p.i. Ademásobservamos que el patrón de expresión de esta enzima fueprincipalmente citoplasmático y puntillado en comparación conel patrón difuso observado al estimular la expresión de PTGS2con PMA. Cuando se analizó en cultivos infectados la expresiónrelativa del mensajero de PTGS2 por RT-PCR, se determinó unaumento de 2.25 veces en el periodo de 0 a 24h p.i. en cultivosinfectados.A tiempos más tardíos de infección (48-54h p.i.) observamos unaumento de la expresión de PTGS2 en células negativas para elantígeno viral pero adyacentes a las infectadas.Por otra parte utilizamos Etoricoxib, un inhibidor selectivo de PTGS2,para investigar su efecto sobre la multiplicación de JUNV. Sedeterminó la viabilidad celular del cultivo A549 en presencia de 20 a200 µuM de la droga. Luego se trataron las células infectadas durante24h en presencia del mismo rango y se cosecharon los sobrenadantespara cuantificar los niveles de producción viral. En estas condicionesy rango de tratamiento la viabilidad se mantuvo siempre por encimadel 80%. Además a la concentración máxima utilizada la inhibiciónselectiva de PTGS2 reduce la producción viral (UFP/ml) en un 70%.De estos resultados podemos concluir que la infección con JUNVinduce la expresión de la enzima celular PTGS2 durante las primeras24h. Para el mismo lapso de tiempo determinamos que la inhibiciónde la actividad de PTGS2 con Etoricoxib reduce la multiplicación viral.La inducción de PTGS2 parecería no ser sostenida ya que a tiemposmás tardíos los cultivos infectados no presentan el mismo patrón deexpresión. MasMás estudios deberán realizarse para corroborar laposible regulación bifásica de esta enzima celular y su significadobiológico durante la replicación de JUNV y otros arenavirus.