Estudio de la asociación del virus Junín a microdominios de membrana

SANDRA CORDO, NÉLIDA CANDURRA.

Tandil, Argentina

Jornada; XXIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2003

Sociedad Argentina de Virología

Estudios previos realizados con inhibidores específicos de la síntesis del colesterol han demostrado un efecto inhibitorio sobre las etapas finales del ciclo de multiplicación del virus Junín (VJ), disminuyendo la infectividad y expresión de proteínas virales en la superficie celular. En este trabajo se evaluó la asociación del VJ a los dominios de membrana ricos en colesterol denominados rafts. Para ello se utilizó una propiedad característica de estos microdominios de membrana: insolubilidad en TX-100 1% a 4°C y flotación en gradientes isopícnicos. Cultivos de células Vero infectados y marcados radioactivamente fueron extraídos a 4° y 37°C en buffer Tris-EDTA salino con TX-100 1%. Los lisados se sembraron en gradientes de sacarosa 5 - 40%, se ultracentrifugaron durante 21 horas y se desarmaron obteniéndose 8 fracciones. Volúmenes iguales de cada fracción fueron inmunoprecipitados con anticuerpos monoclonales contra la glicoproteína G1 y su precursor y luego resueltos en geles de poliacrilamida. La nucleoproteina (NP) del virus fue revelada en cada una de las fracciones con anticuerpos específicos por la técnica de WB. En similares condiciones se procesaron cultivos infectados con virus Influenza para la posterior detección por WB de la glicoproteina hemaglutinina (HA) ya descripta como asociada a rafts. Los resultados de las extracciones a 4°C mostraron la presencia de HA en las fracciones menos densas correspondientes a los microdominios enriquecidos en colesterol. Bajo las mismas condiciones la glicoproteina del virus Junín se encontró asociada a fracciones equivalentes. Las muestras procesadas a 37°C, por el contrario, mostraron una distribución equitativa de ambos marcadores a lo largo de todo el gradiente. Para comprobar la asociación específica de la glicoproteina viral a las fracciones enriquecidas en colesterol los cultivos infectados con VJ se trataron con metil-b-ciclodextrina (compuesto que extrae específicamente el colesterol de la membranas celulares) y luego se procesaron con TX-100 1% como se describió anteriormente. En presencia de este compuesto la glicoproteina del VJ se encontró distribuida en todas las fracciones del gradiente. Estos resultados nos permiten demostrar que la presencia de G1 y su precursor en las fracciones de menor densidad se debe a su asociación específica a los microdominios de membrana enriquecidos en colesterol. Esta asociación representa un nuevo punto de partida para el estudio y comprensión del proceso de morfogénesis y brotación del virus.