Multiplicación del virus Junín en células epiteliales

SANDRA CORDO, MAXIMILIANO CESIO Y ACUÑA, NÉLIDA CANDURRA

Buenos Aires, Argentina

Congreso; VII Congreso Argentino de Virología; 2002

Sociedad Argentina de Virología (SAV)

Los tejidos epiteliales, altamente especializados, presentan células polarizadas que expresan asimétricamente lípidos y proteínas en su membrana apical y basolateral conformando una barrera primaria frente a infecciones virales en el huésped. Muchas líneas celulares expresan el fenotipo polarizado, el cual es similar en algunos aspectos al tejido del cual fueron originadas. El estudio de la interacción  del virus Junín (VJ) con los epitelios permitirá conocer algunos aspectos del mecanismo de su patogenicidad. En este trabajo se investigaron distintos pasos del ciclo de multiplicación del VJ, cepa IV4454, en células Vero1008 (clon derivado de la línea celular Vero) y A549  (línea derivada de un adenocarcinoma de pulmón). Las monocapas fueron crecidas sobre filtros de polietileno transparentes de 1 mm de poro hasta obtener confluencia y verificar su polarización. Luego fueron infectadas con VJ marcado matabolicamente con S35 metionina-cisteína (mi=1). Para la determinación de virus adsorbido se midió la radioactividad incorporada en cultivos precipitados con PCA, previamente infectados e incubados durante 1 h a 4 °C. Los valores de cpm registrados en células infectadas por la cara apical (A) fueron similares a los obtenidos en cultivos infectados por la cara basolateral (BL). Asimismo no se encontraron diferencias entre las células Vero 1008 y las A549 sugiriendo que no existe una adsorción preferencial del virus por ninguno de los dominios de membrana.  Otro grupo de cultivos igualmente infectados e incubados durante 1 h a 4 °C  fueron luego mantenidos a 37 °C por el lapso de 1 h. para permitir el ingreso de los viriones a las células. De esta manera se determinó el paso de penetración viral procesando las células y estableciendo la radioactividad incorporada. No se obtuvieron diferencias significativas en los valores de cpm incorporados entre los cultivos infectados por la cara A y BL, indicando que la penetración del VJ no es preferencial por el dominio A o BL. Para analizar la síntesis de proteínas se infectaron ambas líneas con VJ (mi=1) por la cara A y BL, se lisaron las células a las 24, 48 y 72 hs, se separaron las proteínas en  geles de poliacrilamida y se realizó la técnica de WB revelando con un  anticuerpo monoclonal reactivo para la nucleoproteína del VJ. El análisis de las bandas obtenidas confirman que el VJ entra y multiplica en los cultivos epiteliales independientemente de la superficie de los mismos. Para estudiar los pasos finales del ciclo de multiplicación del VJ se realizó la marcación de su glicoproteína (G1) en la membrana  de células Vero 1008 infectadas por la superficie A y BL utilizando la técnica de IFI con un anticuerpo monoclonal reactivo contra G1. Se observó mayor expresión de G1 en la cara A independientemente de la superficie infectada. Al mismo tiempo se midió la infectividad de los sobrenadantes en la cavidad A y BL a las 24, 48 y 72 hs en monocapas de células Vero 1008 infectadas con las cepas del VJ: XJ, IV4454 y clon 67 (mutante de rango de huésped obtenida en nuestro laboratorio). Los títulos encontrados  por la técnica de UFP  fueron aproximadamente 50 veces mayores en los sobrenadantes de la cavidad A  con respecto a la BL para todas las cepas ensayadas. Estos estudios demuestran que el VJ tiene una entrada y salida bidireccional en las células epiteliales polarizadas siendo la salida preferencial por la superficie apical.