La entrada del virus Junín en las células Vero se realiza por endocitosis mediada por clatrina

GUADALUPE MARTINEZ, SANDRA CORDO, NÉLIDA CANDURRA.

Vaquerías, Córdoba, Argentina

Jornada; XXIV Jornadas Científicas Anuales de la Sociedad Argentina de Virología; 2004

Sociedad Argentina de Virología

Los virus utilizan diferentes caminos para su internalización en la célula huésped. Las vías de ingreso incluyen: vesículas recubiertas por clatrina, microdominios de membrana enriquecidos en esfingolípidos y colesterol (caveolas), macropinocitosis y otras alternativas poco caracterizadas. El virus Junín (JUNV) se adsorbe a las células por unión a un receptor aún no descripto y posterior endocitosis dependiente del pH. Sin embargo, aún no es conocido el camino y mecanismo exacto de internalización. En este trabajo se utilizó clorpromacina (CP), compuesto que impide la formación de vesículas recubiertas por clatrina y, nistatina (NT), que actúa quelando el colesterol en la membrana celular. Se analizó el efecto de ambos compuestos sobre la multiplicación de JUNV en cultivos de células Vero. Se infectaron monocapas celulares con tres multiplicidades de infección (m.i.): 1, 0.1 y 0,05 UFP/célula, en presencia y ausencia de concentraciones no citotóxicas de CP y NT. A las 24 hs post-infección (pi.) se fijaron e incubaron los cultivos con anticuerpos monoclonales anti-NP (nucleoproteína) para su análisis por la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI). Los resultados indicaron una marcada disminución de la expresión de NP en los cultivos infectados con las tres m.i. en presencia de CP (60 - 80%) mientras que los cultivos tratados con NT no superaron  el 30% de inhibición. Se ensayó la actividad virucida de ambos compuestos encontrado un 90% de reducción de la infectividad al pretratar al virus con NT. Estos resultados indicarían que el colesterol presente en la envoltura viral sería extraído o complejado con el compuesto interfiriendo de esta forma con los pasos tempranos del ciclo de multiplicación viral. La expresión de la proteína NP se evaluó también en cultivos infectados y tratados con CP en presencia de anticuerpos neutralizantes, agregados en el sobrenadante a las 2 hs p.i., que impiden la reinfección de las células con el virus progenie. Se analizaron los cultivos por IFI y no se encontraron diferencias significativas en la inhibición de fluorescencia para NP, en presencia o ausencia de anticuerpos. Estos resultados sugieren que el virus Junín utiliza preferencialmente en células Vero el camino endocítico mediado por vesículas recubiertas con clatrina y representan un aporte importante para la identificación de la molécula de membrana que actúa como receptor del virus.