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La sobreexpresión de proteínas en E.coli mediante ingeniería genética, en determinadas condiciones lleva a la formación de agregados intracelulares enriquecidos en la proteína heteróloga, llamados cuerpos de inclusión (CI). Dado su tamaño (1 µm de diámetro), los CI pueden ser aislados del resto del contenido celular por centrifugación. Nosotros demostramos que los CI de -galactosidasa recombinante (-Gal) pueden hidrolizar lactosa. El objetivo de este trabajo fue producir CI de β-Gal recombinante (CIβ-Gal) y evaluar las características funcionales y la estabilidad estructural de la -Gal presente en o liberada del CI. Para obtener CI, el pellet de la centrifugación del cultivo de bacterias lisadas, se sometió a lavados con buffer fosfato/Tritón X-100 (50 mM) y luego buffer sin detergente, mediante centrifugación a 10000 rpm x 10 min. El pellet final se utilizó para evaluar la funcionalidad de los CIβ-Gal frente al pH y a la temperatura. Además, se realizaron lavados periódicos del pellet y se evaluó la funcionalidad y la estructura de la enzima presente en el sobrenadante (-GalCI), proveniente de la desorción de proteína desde los CIβ-Gal.Los CIβ-Gal conservaron un 70% de actividad catalítica, dentro del rango de pH 3-6, en el cual la proteína soluble es totalmente inactiva, y exhibieron un perfil de actividad frente a la temperatura similar al de la proteína soluble. El análisis de la actividad de la enzima presente en el sobrenadante de las centrifugaciones diarias demostró que los cuerpos de inclusión fueron capaces de prevenir la inactivación inducida por la conservación de la enzima a 4°C (heladera) por tiempos prolongados, observada con la enzima soluble. Además, mediante estudios de fluorescencia intrínseca demostramos que -GalCI presenta una estructura más compacta que -Gal (max de -GalCI =337 nm y max de -Gal =340 nm).

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