Caracterización parcial de la actividad agregante proveniente del sobrenadante de células mononucleares humanas (CMH)

MAUGERI N; SCHATTNER M; KEMPFER AC; BERMEJO E; LAZZARI M

Mar del Plata, Argentina

Congreso; SAIC; 1989

Caracterización parcial de la actividad agregante proveniente del sobrenadante de células mononucleares humanas (CMH). El sobrenadante (S) de CMH estimulados con ácido araquidónico (AA) es capaz de agregar plaquetas humanas. Hemos intentado la caracterización de esa actividad. Las CMII fueron obtenidas a partir del método de Boyum, las que fueron lavadas y resuspendidas (8 x 106 CMH/ml) en solución fisiológica y estimuladas con AA 160 μM durante 8 min. Luego las muestras fueron centriguadas y el S obtenido (50-200 μl) fue transferido al PRP normal evaluándose la respuesta plaquetaria a los 3 min (% de agregación). Se incubaron las CMH con BN 52021 (10 μM) durante 5 min obteniéndose inhibición respecto del control (65 ± 9 vs 51 ± 8, p <0,02, n = 8). La incubación (10 min) del S con apirasa (10 μg/mI), anula su actividad (38,5 ± 5,1 vs. 3,7 ± 1,5, n = 8, p <0,001). Se incubaron a 37º C el S y concentraciones conocidas de ADP (0,9 ± 0,2 μM) capaces de inducir igual agregación, obteniéndose tiempos iguales de inactivación (n = 4). Se realizó la ex tracción lipídica con cloroformo/metanol hallando actividad en el residuo acuoso (RA), que desaparece al dializarlo en membranas que retienen PM mayores a 12000 d. La espectofotometría mostró que la curva estándar de ADP tiene un máximo de absorbancia a 260 nm y a 280 nm es el 37% de la de 260 nm; S tiene un máximo a 260 nm pero la lectura a 280 nm es mayor que en el ADP (lo que indica la presencia de impurezas). Concluimos que la actividad de S es digerida por la apirasa, inactivada a 37º C, persiste en el RA con PM < 12000 d y máximo de absorbancia a 260 nm.