Expresión del receptor de interferón tipo I en el linaje megacariocítico

S. NEGROTTO; C. JAQUENOD DE GIUSTI; MJ LAPPONI; J. ETULAIN; L. RIVADENEYRA; RG POZNER; RM GOMEZ; M. SCHATTNER

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunion Anual de SAIC; 2011

Recientemente demostramos que la infección de células CD34+ con virus Junín inhibe la trombopoyesis a través de la vía de interferon tipo I (IFNα y β), lo cual explicaría la trombocitopenia y la hemorragia observadas en la Fiebre Hemorrágica Argentina y otras enfermedades virales. Dado que el receptor de IFN tipo I (IFNAR) en el linaje megacariocítico no ha sido estudiado, en este trabajo analizamos la expresión y funcionalidad del mismo en la línea megacarioblástica MEG01, progenitores CD34+, megacariocitos (mcs) inmaduros (día 6 de cultivo), mcs maduros (día 12 y 18) y plaquetas (plaq) (n=6-7). Nuestros resultados indican que el ARNm del IFNAR se expresa en todas las etapas de megacariopoyesis (RT-PCR). Ensayos de inmunofluorescencia y citometría de flujo revelaron que todos los tipos celulares, excepto las plaq, expresan IFNAR1 a nivel de proteína. Por Western blot, se detectó la presencia de IFNAR1 y 2 en todos los tipos celulares, aunque en plaq estaban muy levemente expresadas. Con respecto a IFNAR1, se observaron dos bandas de 130 y 90 kD en MEG01, y dos bandas de 130 y 60 kD en CD34+ y mcs. La estimulación de mcs con IFNβ (500 U/ml) aumentó la expresión de los genes antivirales MXA e IRF7 (12.3±2.2 y 54.6±9.5 veces del control respectivamente, p<0.05, PCR cuantitativa) e indujo la fosforilación de STAT1/2 (Western blot), sugiriendo que el IFNAR es funcional en este linaje. Por otro lado,  el PolyI:C (100 μg/ml), un ARN sintético que simula una infección viral, estimuló la liberación de IFNβ de los mcs (71.5±10.2 vs. control=2.2±1.2 pg/ml, p<0.05, ELISA). En conclusión, nuestros hallazgos revelan que los mcs expresan el IFNAR funcional y liberan IFN, demostrando no solo que la regulación de la megacario/trombopoyesis se debe a una interacción específica del IFN con su receptor sino también que los mcs podrían desempeñar un papel en la defensa antiviral por ser respondedores y además productores de IFN tipo I.