INVESTIGADORES
GOMEZ LOBATO Maria Eugenia
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Título:
Determinaciones de Biología Molecular en Vegetales: Extracción de ARN, purificación, obtención de ADNc, expresión relativa de genes por PCR en tiempo Real (RT-qPCR)
Autor/es:
MARIA EUGENIA GOMEZ LOBATO
Fecha inicio:
2021-10-01
Fecha finalización:
2021-10-01
Campo de Aplicación:
Produccion vegetal-Otros
Descripción:
o Extracción de ARN vegetal: se utilizarán dependiendo la muestra el protocolo que más se adecue(método del borato sódico en caliente (Wan y Wilkins, 1994) o trizol (Sigma). Se cuantificará el ARNobtenido y se realizará un gel de agarosa desnaturalizante para observar la integridad del ARN obtenido.o La purificación de los ARN obtenidos se realiza para eliminar genómico que se encuentre en lamuestra, utilizando la enzima RQ1 DNasa (Promega). Posteriormente se cuantificará el ARN purificado.o Obtención de ADNc utilizando la enzima transcriptasa reversa M-MLV (Promega) según indicacionesdel fabricante. o Diseño de oligonucleótidos especiales para ser usados en PCR en Tiempo Real oMediante PCR se chequearán los cDNA obtenidos y los oligonucleótidos diseñados o Curva deeficiencia en PCR en tiempo real o Expresión relativa de genes mediante PCR en Tiempo Real.
