INCREMENTO DE LA EXPRESIÓN DE LA MAP QUINASA FOSFATASA-2 (MKP-2) POR HCG/AMPC EN CÉLULAS DE LEYDIG DE LA LÍNEA MA-10: EFECTO SOBRE LA ESTEROIDOGÉNESIS.

N V GÓMEZ 1 ,; L BRION; 1, M M MORI SEQUEIROS GARCÍA; A ACQUIER; C F MÉNDEZ; C PAZ

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2009

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Las MAP quinasas fosfatasas (MKPs) son enzimas que in vivo desfosforilan específicamente a las MAP quinasas (MAPKs). MKP-2 es una isoforma que desfosforila a ERK1/2 y que se induce generalmente por los mismos estímulos que activan a las MAPKs. El objetivo de este trabajo fue analizar el efecto de la estimulación hormonal (LH/hCG) sobre la expresión de MKP-2 en células de Leydig de la línea MA-10, dado que en este sistema hCG y AMPc promueven la activación de MAPKs como ERK1/2. Mediante RTPCR determinamos que hCG y AMPc producen un incremento transitorio del ARNm de MKP-2 que alcanza un máximo (2,5 veces respecto del control) a las 3 hs. de estimulación. El análisis por Western blot e inmunocitoquímica también revela la inducción de MKP-2 por AMPc. En células transfectadas con un vector que permite la expresión de la proteína recombinante Flag-MKP-2 bajo un promotor constitutivo, MKP-2 se acumula en respuesta a la estimulación con hCG o AMPc. Basados en el hecho que MKP-2 inactiva a las MAPKs, propusimos que su expresión en células de Leydig podría afectar la transcripción de genes que se activan por acción hormonal vía ERK1/2, como CYP11A1 (que codifica para la enzima P450scc). Demostramos, mediante la co-transfección de un plásmido conteniendo el ADNc de MKP-2 bajo el control de un promotor constitutivo (pRc/CMVi-MKP-2) y de un vector conteniendo un gen reportero (luciferasa) bajo el control del promotor de CYP11A1, que AMPc aumenta la actividad del promotor (expresada como actividad relativa de luciferasa): pRc/CMVi =5,04±0,14; pRc/CMVi +AMPc=12,26±0,97 (P<0,001) y que la sobreexpresión de MKP-2 disminuye este efecto: pRc/CMVi-MKP-2+AMPc=6,43±0,13 (P < 0,001). Colectivamente, estos resultados demuestran que la expresión de MKP-2 en células de Leydig MA-10 es regulada por acción hormonal a través de mecanismos transcripcionales y posttraduccionales y que la actividad de MKP-2 puede modular la expresión de proteínas necesarias para la síntesis de esteroides.