LA TIROSINA FOSFATASA SHP2 DE ZONA FASCICULATA DE ADRENAL DE RATA SE ACTIVA POR FOSFORILACIÓN IN VITRO CON PKA Y SE IDENTIFICA

GOROSTIZAGA A.; BRION L.; COOKE M.; MELE P.; PODESTÁ E.; CORNEJO MACIEL F.; PAZ C.

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2009

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

En estudios previos describimos que en zona fasciculata (ZF) de adrenal de rata, ACTH promueve la activación de tirosina fosfatasas (PTPs) de 115, 80 y 50 kDa. Dado que las características de la PTP de 80 kDa de ZF (PTP80) son compatibles con las descriptas para SHP2, el objetivo de este trabajo fue analizar si PTP80 es SHP2. Para ello, se obtuvieron las proteínas citosólicas de ZF de ratas controles y tratadas con ACTH (200 ìg/kg peso, 15 minutos) y se inmunoprecipitaron con un anticuerpo anti-SHP2. Los inmunoprecipitados (IPs) se analizaron por Western blot con el anticuerpo específico y mediante SDS-PAGE en geles de actividad de PTPs. El ensayo de Western blot reveló una única banda de 80 kDa de igual intensidad en ambas muestras. El análisis en geles de actividad también mostró una única banda de actividad (80 kDa) en ambas muestras, siendo de mayor actividad (3 veces) la fosfatasa proveniente de animales tratados con ACTH. Esto sugiere que SHP2 es activada por ACTH en ZF de adrenal de rata. Dado que nuestros trabajos previos sugerían que la activación de PTPs por ACTH involucra la fosforilación de estas enzimas por PKA, analizamos el efecto de la fosforilación in vitro con PKA sobre la actividad de la SHP2 presente en ZF. Se realizó la fosforilación de las proteínas citosólicas con PKA y ATP, en ausencia o presencia de [ã32P] ATP. El análisis de los IPs de SHP2 en geles de actividad mostró una banda de actividad correspondiente a una proteína de 80 kDa cuya intensidad es mayor en las muestras fosforiladas con PKA respecto a las fosforiladas en ausencia de esta quinasa. El análisis por SDS-PAGE y autorradiografía de los IPs de SHP2 de muestras fosforiladas en presencia [32P] ATP reveló que la SHP2 de ZF es sustrato de PKA. En conjunto, los resultados indican que la PTP de 80 kDa de ZF de adrenal de rata que se activa por ACTH es SHP2 y sugieren que su activación in vivo por ACTH puede ser el resultado de su fosforilación por PKA.