Puesta a punto de la técnica de Western blot como prueba confirmatoria para la detección de anticuerpos séricos anti-Trichinella en porcinos

RIVA, ELIANA; MORAN, C; SILVA, J; LARSEN, K; FRANCESCHETTI, P; BERNAT, G; ASENSIO C.; ESTEIN, S

Tandil

Jornada; XIV Jornadas de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria, II Reunión de la Red Latinoamericana de Inmunología Veterinaria; 2022

La trichinellosis en porcinos tiene impacto directo en la economía y la salud pública. El objetivo del trabajo fue poner a punto la técnica de Western blot (WB) para la confirmación de sueros porcinos con resultado sospechoso o positivo al ELISA como una estrategia de diagnóstico in vivo de la trichinellosis. Se utilizaron 27 sueros con reactividad conocida en ELISA, confirmada por digestión artificial (DA). Diecisiete sueros provenían de 2 cerdos infectados experimentalmente y muestreados a distintos tiempos postinfección (p.i.), 5 de animales de un foco y 5 procedentes de granjas modelos (controles negativos). El WB se basó, igual que el ELISA, en el antígeno de excreción-secreción de larvas musculares de T. spiralis (AgE/S). El AgE/S (66 μg) fue separado por SDS-PAGE al 12 % y transferido a membrana de nitrocelulosa. La membrana se bloqueó con PBS-T/leche descremada 5 % a 37°C, 1 h. Se cortaron tiras y se incubaron con los sueros (1/100) en PBS-T/leche descremada 3 %, 1 h. Las tiras se lavaron con PBS-T y se incubaron con el anti-porcino IgG conjugado a peroxidasa (1/12500), 1 h. La reacción se reveló con DAB+Tris/0,06 % H2O2. La detección del triplete de bandas entre 40-60 kDa se interpretó como específico de la infección por Trichinella. En los sueros de los animales infectados experimentalmente la estrategia combinada resultó positiva a partir del día 21 p.i. En los sueros de cerdos de foco, dos muestras negativas a DA y positivas a ELISA, resultaron no reactivas en WB. Dos sueros asociados a cargas de 0,05 y 0,15 larvas/g, respectivamente reaccionaron en ELISA aunque sólo el último en WB. Un suero asociado a carga de 0,2 larvas/g fue negativo a ambas pruebas. La combinación ELISA+WB en serie aumentaría la especificidad del inmunodiagnóstico. Se ampliará el número de sueros porcinos caracterizados para mejorar la performance de esta estrategia diagnóstica.