GENOTIPADO SEXUAL NO INVASIVO DE PAICHE ARAPAIMA GIGAS POR QPCR: UN ENFOQUE BIOINFORMÁTICO APLICADO PARA IDENTIFICAR DIFERENCIAS SEXUALES

LÓPEZ-LANDAVERY, EDGAR; CORONA-HERRERA, GUILLERMO; SANTOS-ROJAS, LUIS E.; HERRERA-CASTILLO, NADHIA M.; DELGADIN, TOMÁS H.; TAPIA-MORALES, SANDRA; GONZÁLEZ-MARTINEZ, SOPHIA; REYES-FLORES, LORENZO E.; MARÍN, ALAN; YZÁSIGA-BARRERA, CARMEN G.; FERNANDINO, J.I.; ZELADA-MÁZMELA, ELIANA

Congreso; XXIII JORNADAS ANUALES DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE BIOLOGÍA; 2021

Sociedad Argentina de Biología

Arapaima gigas, uno de los peces de agua dulce más grandes del mundo, está sufriendo una alta presión pesquera y pérdida de hábitat, lo que amenaza el estado de conservación de sus poblaciones naturales. De gran importancia cultural para los pueblos amazónicos, el paiche o pirarucu A. gigas tiene una gran demanda por su carne, usos ornamentales y otros subproductos como las escamas. La acuicultura es una solución viable a este dilema. Sin embargo, el hecho de que A. gigas no presenta dimorfismo sexual hasta los 5 años y su largo período de madurez sexual son obstáculos importantes para el manejo de reproductores y la producción de alevines. Así, el objetivo de este estudio fue desarrollar una herramienta molecular para el sexado genotípico no invasivo del paiche a lo largo de su ciclo de vida. Recolectamos muestras de gónadas, aletas y mucus branquial de especímenes juveniles para análisis histológico y molecular. Basándonos en la secuencia del genoma de paiche disponible recientemente, y utilizando el método actual de NGS, implementamos un enfoque novedoso, llamado Genome Differences by Unmapped Reads, para identificar marcadores sexuales de ADN. Encontramos una Región Específica Masculina (MSR), identificada como MSR_3728, presente solo en machos. A continuación, diseñamos dos conjuntos específicos de cebadores en esta región para identificar el sexo genotípico mediante ensayos de qPCR. Ambos conjuntos de cebadores, MSR_107 y MSR_129, detectaron machos con una precisión del 100%. Luego, desarrollamos una reacción de qPCR dúplex para cada conjunto de cebadores a lo largo de un gen de mantenimiento, analizamos las curvas de fusión y detectamos machos mediante la observación de dos picos distintos, uno para MSR_107 o MSR_129 y otro para el gen de referencia, mientras que las hembras solo presentaron el pico del gen de referencia. Se obtuvieron los mismos resultados para las gónadas, las aletas y, curiosamente, una fuente no invasiva: las muestras de mucus branquial. Finalmente, las gónadas se evaluaron histológicamente en una prueba doble ciego, mostrando un 100% de precisión con el ensayo qPCR para identificar machos y hembras. Los datos demostraron claramente un enfoque novedoso bioinformático para identificar marcadores sexuales de ADN, seguido de un método rápido, no invasivo y rentable de qPCR dúplex para sexar A. gigas. Estos resultados pueden ser valiosos para los estudios de conservación y acuicultura del paiche, para ayudar a reducir la presión pesquera sobre sus poblaciones naturales.