Generación de una proteína quimerica con capacidad agonista TLR4/TLR5

HIRIART YANINA; ROSSI ANDRES H.; ERREA AGUSTINA; MORENO GRISELDA; ALZOGARAY V.; GOLDBAUM, FERNANDO; BERGER, PAULA; RUMBO, MARTIN

Mar del Plata

Congreso; LVII Reunión Cientifica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica- LX reunión anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2012

Los agonistas de distintos TLRs han cobrado interés en los últimos años por su potencial aplicación como adyuvantes vacunales. Lumazina sintetasa de B. abortus (BLS) es una proteína decamérica que actua como carrier de antígenos fusionados a su extremo N-terminal y es capaz de activar y madurar células dendríticas vía TLR4. Flagelina (FliC) es el monómero estructural del flagelo bacteriano y por su capacidad agonista de TLR5 ha sido propuesta como adyuvante.El objetivo del presente trabajo fue generar una proteína de fusión con la hipótesis de que la combinaión de ambos agonistas en una misma estructura generaría un producto con propiedades biológicas de interés en el campo de adyuvantes vacunales. Se generó una construcción insertando una secuencia codificante para FliC de S. tiphimurium en el extremo N-terminal de BLS. Se la expreso en un sistema bacteriano y purificó por cromatografía de afinidad utilizando aticuerpos monoclonales anti FliC generados en nuestro laboratorio. El análisis de SDS-PAGE mostró una banda del tamaño esperado (52 KDa) que mostró actividad por westernblot con anticuerpos anti-FliC y anti-BLS. La quimera mostró  capacidad agonista de TLR5  al estimular la línea reportera Caco-CCL20-luciferasa, que corresponde a flagelina pero no a otros agonistas de TLRs. La actividad agonista de TLR4  se demostró en un cultivo primario de células adherentes de bazo, poco respondedoras a agonistas de TLR5, que produjeron IL6 frente a la estimulación con BLS y la quimera.. Luego de estimular por vía intranasal o peritoneal animales C3HHeJ, no respondedores vía TLR4, se analizaron las poblaciones reclutadas por citometría de flujo. En ambos casos el reclutamiento de neutrófilos en respuesta a la quimera fue comparable al inducido con FliC. Los resultados obtenidos indican que se ha generado una proteína quimera BLS-FliC con capacidad agonista para las vías TLR4/TLR5 en la misma molécula, con potenciales aplicaciones en el campo de la vacunación