CARACTERIZACIÓN FUNCIONAL DE IFABP-D98D, UNA VARIANTE ESTRUCTURAL TODO BETA

GUERBI MX; RODRIGUEZ SAWICKI L; FALOMIR LOCKHART LJ; CURTO LM; FRANCHINI G; DELFINO JM; CÓRSICO B

La Plata, Buenos Aires

Congreso; XXXVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica (SAB); 2008

Los enterocitos expresan dos proteínas homólogas que unen ácidos grasos de cadena larga (FABPs): FABP de intestino (IFABP) e hígado (LFABP). Las FABPs son proteínas pequeñas (14-15kDa) con variable identidad de secuencia, pero con estructura tridimensional prácticamente superponible. Esta está formada por dos hojas- ortogonales de cinco hebras cada una, entre las cuales se forma el bolsillo de unión. Las hebras están conectadas por giros, a excepción de las dos primeras que están separadas por dos segmentos -helicoidales que funcionarían como ?tapa? del barril y tienen un rol clave en la funcionalidad de las FABPs. En un intento por vislumbrar la mínima estructura proteica que conserve funcionalidad, se obtuvo una variante de IFABP -98- que carece de los extremos N- y C-terminales (residuos 29-126 de IFABP), pero conserva el sitio de unión del ligando. Ensayos previos empleando ligandos naturales sugieren que 98 conserva la habilidad de unir ligandos[1]. Con el propósito de profundizar en el estudio de la funcionalidad de dicha variante, investigamos su capacidad de unir y transferir ligandos hacia membranas. Inicialmente, cuantificamos la afinidad de unión de análogos fluorescentes de ácidos grasos antroiloxy-derivados (AOFA) de 98, comparativamente con otra variante estructural que carece únicamente de la región -helicoidal (IFABP-Helixless) y con la proteína de largo completo. Seguidamente, evaluamos la distribución de ligandos entre la fase proteica y la fase vesicular. En función de los resultados observados, definimos las condiciones para medir la cinética de transferencia de AOFA hacia membranas fosfolipídicas conteniendo un aceptor (FRET). Analizando el efecto de la concentración y la composición de las vesículas aceptoras proponemos que al igual que IFABP-Helixless, 98 presenta un mecanismo de transferencia del ligando de tipo difusional, mientras que para IFABP es de tipo colisional. Esta serie de trabajos contribuye a identificar los determinantes estructurales responsables de la funcionalidad de las FABPs y de su interacción con membranas.