ección de una posible beta-lactamasa resistente a inhibidores, TEM-163, en Escherichia coli

ALEJANDRA BADARACCO; JUAN AYALA; CYNTHIA RODRÍGUEZ; ANGELINA FAMIGLIETTI; GABRIEL GUTKIND; JOSÉ DI CONZA

Rosario

Jornada; XIII Jornadas Argentinas de Microbiología; 2008

AAM

p style="TEXT-ALIGN: justify; MARGIN: 0in 0in 0pt -0.5in" class="MsoNormal">TEM-1 TEM-1 es la β-lactamasa clase A presente con mayor frecuencia en aislamientos clínicos resistentes a ampicilina y sensibles a inhibidores de uso común en la clínica, como ser el ácido clavulánico. De todas formas la resistencia a estos últimos ha emergido. Una de las posibles causas es debido a mutaciones puntuales sobre blaTEM-1 que confiere resistencia a inhibidores (IRT). El fenotipo IRT fue caracterizado por la resistencia a la combinación β-lactámico - clavulánico con susceptibilidad a cefalosporinas de tercera generación, y a cefoxitina. Pertenecen al grupo 2br de Bush-Jacoby-Madeiros. Los cambios aminoacídicos más importantes que pueden dar un fenotipo IRT son: reemplazando la arginina 244 por una cisteína serina o treonina; la sustitución de una asparagina 276 por ácido aspártico o una arginina 275 por una leucina  y/o reemplazando la metionina 69 por un aminoácido alifático. Estas sustituciones solas o combinadas, resultan en la pérdida de la actividad inhibitoria de los inhibidores de β-lactamasas sin otra modificación fundamental del perfil de sustrato de las β-lactamasas de TEM-1. Los objetivos del presente trabajo fue caracterizar el/los mecanismos de resistencia presente en un aislamiento de E. coli que presenta resistencia a la combinación β-lactámico-inhibidor y profundizar el estudio en la caracterización de enzimas tipo TEM. El microorganismo fue recuperado de un urocultivo en el Hospital de Clínicas de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires en el año 2006. El aislamiento es resistente a ampicilina, piperacilina, cefalotina, a la combinación ampicilina/sulbactam y amoxicilina/clavulanato pero sensible cefoxitina y cefalosporinas de tercera generación. El extracto crudo de dicho aislamiento mostró actividad b-lactamasa con nitrocefin y mediante isoelectronfoque analítico se observo una única enzima de pI 5,4 al revelarlo mediante método iodométrico empleando ampicilina como sustrato. Mediante PCR se investigaron distintos grupos de genes: blaSHV, blaOXA-2, blaOXA-10 y blaTEM, empleando oligonucleótidos específicos. En concordancia con el pI observado, sólo se obtuvo un amplicón del tamaño esperado para el grupo blaTEM. La secuenciación de dicho fragmento reveló que contiene un nuevo gen blaTEM (que codificaría para la enzima TEM-163, GenBank Nº: EU815939) que presenta similitud con blaTEM-122. Exhibe el mismo cambio nucleotídico que presenta blaTEM-122 (considerada resistente a inhibidores) respecto a blaTEM-1. Este cambio se traduce a un cambio aminoacídico de una glutamina en lugar de una arginina en la posición 275 (numeración de Ambler). Este nuevo gen se diferencia de blaTEM-122 porque presenta una transversión (una timina en lugar de una adenina) en la posición 857, esta variación se traduciría dentro de la proteína madura en un cambio de una leucina por una histidina, en la posición 289. Que el nuevo gen conserve el cambio que le otorga a blaTEM-122 resistencia al inhibidor nos permite postular que el mismo podría tener un comportamiento similar a la misma.