Characterization of Pseudomonas spp. from soil and rhizosphere with biocontrol activity against fungal pathogens and plant growth promoting properties (PGPP).

AGARÁS B; SCANDIANI M; CARMONA M; LUQUE A; FERNANDEZ L; WALL LG; VALVERDE C

SM de Tucumán

Congreso; VII Congreso Argentino de Microbiología General “SAMIGE del Bicentenario”; 2011

SAMIGE

En Argentina, los suelos destinados a la agricultura están siendo principalmente manejados con siembra directa, dejando de lado la labranza tradicional. Con el fin de evaluar los efectos de este manejo sobre la biología del suelo y su productividad, se ha constituido el consorcio de investigación público-privado denominado BIOSPAS. En este marco, nuestro objetivo es estudiar al género Pseudomonas., desarrollando un procedimiento para seleccionar, cuantificar y analizar la diversidad de este grupo, importante en este ecosistema por sus reconocidas propiedades promotoras del desarrollo vegetal. Las muestras comprenden suelo desnudo y rizósfera de los cultivos allí sembrados, provenientes de lotes con buenas prácticas agrícolas y malas prácticas agrícolas, según lo definido por AAPRESID. Como control, se toman muestras de ambientes sin intervención humana. Para la cuantificación de bacterias cultivables se hicieron plaqueos en medio selectivo (Gould’s S1) que nos permite estimar el número de bacterias mesófilas pertenecientes al género Pseudomonas. Además, se contabilizaron las pseudomonas fluorescentes, iluminando las placas con luz UV. A partir de estos cultivos, se llevaron a cabo estudios moleculares de diversidad empleando los genes oprF y gacA, previamente descritos como marcadores de este género bacteriano. Para ello, se desarrollaron nuevos oligonucleótidos específicos y se setearon esquemas de PCR-RFLP y DGGE. Asimismo, se evaluó la correspondencia entre el crecimiento en S1, la presencia del gen oprF revelada por PCR y la pertenencia al género Pseudomonas, mediante secuenciación de los genes 16S rDNA y oprF de aislamientos morfológicamente diversos obtenidos a partir de los recuentos en placa con medio S1. De esta manera, se confirma tanto el poder de selectividad del medio de cultivo, como la elección de oprF como gen marcador de género, permitiéndonos en el futuro desarrollar análisis moleculares de diversidad con este gen en forma independiente de cultivo. Los análisis sobre las muestras tomadas durante el verano y el invierno de 2010, revelaron un “efecto rizósferico” de (sobre) Pseudomonas spp. (aumento poblacional y selección preferencial), y una tendencia a disminuir el número total en los suelos con malas prácticas agrícolas. La puesta a punto de estas metodologías constituye el inicio del estudio sistemático de las poblaciones de Pseudomonas spp. en suelos y rizósferas, y su aplicación en el análisis de los efectos de diferentes factores sobre dicha comunidad.