Vacunología inversa como estrategia para la identificación de antígenos anclados por puentes glicosilfosfatidilinositol (GPI) de protozoos patógenos

TOMAZIC, MARIELA L; RODRIGUEZ, ANABEL E; FLORES, DANIELA; POKLEPOVICH, TOMÁS; GANZINELLI, SABRINA; FLORIN-CHRISTENSEN, MÓNICA; SCHNITTGER, LEONHARD

La Plata

Taller; Taller de Vacunología; 2016

CCT-La Plata CONICET

Los protozoos apicomplejos Babesia bovis y Cryposporidium parvum afectan al ganado bovino ocasionando pérdidas económicas. B. bovis es un hemoprotozoo transmitido por garrapatas mientras que C. parvum es una especie zoonótica que se transmite vía fecal-oral, a través del ooquiste eliminado con las heces. Las vacunas disponibles contra la babesiosis bovina son vivas atenuadas y, en consecuencia, tienen importantes desventajas. Hasta el presente no hay vacunas disponibles contra la criptosporidiosis. Las proteínas ancladas a la superficie por puentes GPI están implicadas en el proceso invasivo de protozoos parásitos y muchas son inmunodominantes, por lo que constituyen atractivos candidatos vacunales. Para predecir las proteínas ancladas por GPI se llevó a cabo una estrategia de vacunología inversa. Se diseñó un sistema de selección utilizando una combinación de herramientas bioinformáticas a partir de los proteomas de ambos parásitos. Se identificaron 17 y 14 proteínas de B. bovis y C. parvum, respectivamente. Posteriormente, se evaluó la presencia de: dominios relevantes, ortólogos y epitopes B. Se seleccionaron 2 candidatos de B. bovis y 3 de C. parvum y se expresaron en E.coli. Las proteínas recombinantes se purificaron por cromatografía de afinidad a iones metálicos y se enfrentaron a sueros bovinos infectados naturalmente por B. bovis o C. parvum en ensayos de inmunoblots. Se analizó el grado de conservación de las 5 proteínas mediante PCR, secuenciación y análisis in sílico.Se obtuvo más del 90% de conservación para los 5 candidatos, esto sumado a la ausencia de ortólogos, sugiere que son potenciales candidatos vacunales especie-específicos. La detección de anticuerpos contra los 5 antígenos demuestra que se expresan en el parásito durante la infección in vivo, poseen epitopes B conservados y son inmunodominantes. En conjunto, los resultados indican que el diseño bioinformático empleado es una herramienta muy potente para la identificación de candidatos vacunales en protozoos patógenos.