Utilización de Tetrahymena thermophila como modelo de expresión de la proteína con anclaje glicosilfosfatidilinositol, GP60 de Cryptosporidium parvum.

ELGUERO EUGENIA; TOMAZIC MARIELA L; MONTES GUADALUPE; NUDEL CLARA; SCHNITTGER LEONHARD; NUSBLAT ALEJANDRO

Buenos Aires

Congreso; XXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozología .; 2015

Sociedad Argentina de Protozoología (SAP)

Cryptosporidium parvum es un protozoo parásito del phylum Apicomplexa causante la criptosporidiosis, enfermedad que genera diarreas en terneros neonatos y es responsable de la mortalidad de animales en nuestro país e importantes pérdidas económicas en la actividad ganadera. Uno de los principales determinantes de los diferentes subtipos de Cryptosporidium es la proteína de superficie GP60. Esta proteína, al igual que la mayoría de las proteínas de superficie del phylum, se encuentran unidas a la membrana por un anclaje de tipo glicofosfatidilinositol (GPI), un glicósido frecuentemente implicado en procesos de reconocimiento, adhesión y/e invasión a las células hospedadoras. Estas características convierten a las proteínas GPI en moléculas esenciales para la superviviencia de los protozoos, ejerciendo un fuerte efecto inmunomodulador en el organismo hospedador, lo que las convierte en candidatos vacunales de gran valorbiotecnológico. En este trabajo se realizó la expresión heteróloga del antígeno GP60 de C. parvum en el ciliado Tetrahymena thermophila, el cual ha demostrado ser capaz de expresar, plegar y procesar correctamente otras proteínas del tipo GPI provenientes de diferentes protozoos parásitos. Para su realización se utilizó la estrategia de transformación en cepas conjugantes de T. thermophila, utilizando vectores episomales de ADN ribosómico y expresando la proteína GP60bajo el promotor de MTT1 inducible por Cadmio. Se evaluó mediante Western Blot con anticuerpos específicos la presencia de GP60, y se observó que T. thermophila es capaz de procesar esta proteína en una variante de 40 kDa. Esta variante se mantuvo incluso luego del enriquecimiento en fracción GPI indicando que éste ciliado no solo es capaz de expresar sino también de realizar las modificaciones post-traduccionales necesarias para la obtención del antígeno GP60 proveniente de C. parvum.