EFECTO DE FACTORES DE CRECIMIENTO SOBRE LA MADURACIÓN IN VITRO DE COMPLEJOS CÚMULO-OVOCITO BOVINOS

GOMEZ, PAULA; GARCÍA, ELINA VANESA; BARRERA, AD; MARIELA ROLDÁN OLARTE

San Miguel de Tucumán

Congreso; Reunión Conjunta de Sociedades de Biología; 2020

Sociedades de Biología

En el área de la biotecnología de la reproducción, existe un gran interés en optimizar las condiciones de cultivo para obtener ovocitos competentes que produzcan embriones de alta calidad. Por ello, el estudio de factores moleculares que favorecen la maduración y la calidad de ovocitos bovinos es fundamental para mejorar las técnicas de producción in vitro de embriones. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de los factores de crecimiento VEGF-D y BMP5 sobre la maduración in vitro (MIV) de complejos cúmulo-ovocito (COCs) bovinos, analizando índice de expansión; porcentaje de maduración nuclear y expresión de genes en células del cumulo (CC). Los COCs inmaduros se obtuvieron por aspiración de folículos ováricos de vaquillonas faenadas y se maduraron in vitro en presencia de VEGF-D y BMP-5 en distintas concentraciones (0, 1, 10 y 100 ng/ml). Para evaluar el índice de expansión del cúmulo, se registraron las áreas de los COCs al inicio (T0) y a las 22 h de MIV y se calculó la relación entre las mismas para cada lote. Además, ovocitos de cada tratamiento se fijaron, se tiñeron con Hoëscht y se registraron los porcentajes de ovocitos en metafase II (MII). No se observaron diferencias significativas en la expansión de los COCs en presencia de las moléculas analizadas. Tanto la incorporación de VEGF-D como de BMP-5 produjo un aumento en el porcentaje de ovocitos en MII, alcanzando los mayores porcentajes con la concentración de 100 ng/ml de VEGF-D y 10 ng/ml de BMP-5. Se seleccionaron estas concentraciones para los ensayos de expresión génica. Con la finalidad de evaluar si la presencia de VEGF-D y BMP-5 afectan los niveles de transcripción en las CC, los COCs se maduraron in vitro en tres grupos: control, BMP-5 10 ng/ml y VEGF-D 100 ng/ml. Luego de 22 h de MIV, se disgregaron las CC y se recuperaron las mismas de cada tratamiento. Mediante RT-PCR semicuantitativa se evaluó la expresión de genes relacionados con el ciclo celular (CCNB1), las uniones celulares (GJA), el estrés oxidativo (SOD2), la apoptosis (BAX y BCL2) y la funcionalidad del cúmulo (HAS2). Se observó una tendencia de aumentar el nivel de expresión de los genes BCL2, CCNB1 y HAS2 en las CC estimuladas con ambos factores, respecto al control sin estimular, mientras que se observó una disminución en el nivel de expresión de BAX. La relación BCL2/BAX se vio significativamente aumentada en las CC estimuladas con ambos factores. Los genes SOD2 y GJA, no presentaron diferencias significativas en los niveles de expresión en ninguna de las condiciones experimentales. En conclusión, la suplementación de VEGF-D y BMP-5 al medio de MIV tendría un efecto positivo sobre los COCs bovinos, ya que con ambos factores de crecimiento se obtuvieron mayores porcentajes de maduración nuclear y favorecieron la expresión de genes relacionados con la supervivencia de las CC. Estos resultados reflejan la importancia que tiene incorporar factores de crecimiento presentes en el microambiente materno a los medios de cultivo in vitro.