ACTIVACIÓN DE LA VÍA DE SEÑALIZACIÓN BMP EN CULTIVOS PRIMARIOS DE CÉLULAS EPITELIALES DEL OVIDUCTO BOVINO

BRAVO MIANA, ROCÍO DEL CARMEN; GARCÍA, D.C; GARCÍA, EV; VALZ GIANINET, JN; MARIELA ROLDÁN OLARTE; VALDECANTOS, PA.

San Miguel de Tucumán

Jornada; Congreso Nacional de Estudiantes de Bioquímica y Biotecnología. XVI Jornadas Científicas y Encuentro de Jóvenes Investigadores Augusto E. Palavecino.; 2015

Centro Único de Estudiantes de la Fac. de Bioq. Qca. y Fcia. de la UNT

El oviducto bovino cumple importantes funciones relacionadas con la reproducción, desarrollo embrionario temprano y transporte de los embriones hacia el útero. Las células epiteliales que tapizan el oviducto sintetizan y liberan macromoléculas al lúmen durante el ciclo estral y la preñez temprana. Entre estas macromoléculas, se encuentran diferentes factores de crecimiento como los miembros de la familia del factor de crecimiento transformante beta (TGF-β), incluyendo las proteínas morfogenéticas óseas (BMPs). Las BMPs desempeñan papeles importantes en el desarrollo y la homeostasis de los tejidos; poco se sabe acerca de su función en el oviducto. Particularmente, BMP5 se expresa diferencialmente en las células del istmo oviductal y no en ámpula. La presencia y modulación de la actividad de los receptores TGF-β/BMP, así como la expresión de proteínas reguladoras de la vía, como las SMADs, constituyen pasos críticos en la señalización mediada por BMP5. El objetivo de este trabajo es evaluar la acción de BMP5 en células epiteliales del istmo oviductal bovino cultivadas in vitro, estudiando la expresión de receptores BMP y otros componentes de la vía de señalización. Para ello se diseñaron cebadores específicos para los receptores BMP y se amplificaron por PCR fragmentos de los receptores a estudiar, tanto en cultivos de las células epiteliales (in vitro) como en células sin cultivar (in vivo). A su vez, se realizaron cultivos de células epiteliales del oviducto bovino a los que se les adicionó BMP5 durante 1, 3 y 5 h. Posteriormente se procedió a la extracción de ARN total, utilizando Tri Reagent como buffer de lisis, purificación con cloroformo y se sintetizó el ADNc utilizando la enzima MMLV y oligo dT. La expresión del ARNm de los genes codificantes de la proteína Smad6 se analizó por RT-PCR en tiempo real utilizando GAPDH como control de referencia. Los resultados obtenidos mostraron que la estimulación con BMP5 afectó la expresión del gen Smad6, al comparar con los controles, ya que se observó una tendencia al aumento en los niveles de expresión a distintos tiempos. Mediante este estudio se pudo establecer que BMP5 actúa como regulador autócrino de la función del epitelio oviductal.