CULTIVOS PRIMARIOS DE CÉLULAS EPITELIALES DEL OVIDUCTO BOVINO

BRAVO MIANA, ROCÍO DEL CARMEN; ROLDÁN OLARTE, EM; GARCÍA, EV ; VALZ GIANINET, JN; VALDECANTOS, PA

San Miguel de Tucuman, Tucuman, Argentina

Jornada; XV Jornadas Científicas y Encuentro de Jóvenes Investigadores ?Augusto Palavecino?; 2014

Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia, UNT

El oviducto de los mamíferos provee de un microambiente óptimo para que ocurran la fecundación y el desarrollo apropiado del embrión hasta que éste ingrese en el útero para su implantación. Las células epiteliales del oviducto secretan proteínas que contribuyen a la formación de este ambiente; tales como diferentes factores de crecimiento (FC). El objetivo de este trabajo fue obtener dos modelos de cultivos primarios de células epiteliales del oviducto bovino: en monocapa y en suspensión. Muestras de oviductos de vaquillonas recientemente faenadas se dividieron en dos fracciones correspondientes a las regiones de ámpula e istmo; se recuperaron las células del epitelio oviductal ejerciendo una suave presión sobre la superficie externa de ambas regiones. Los fibroblastos contaminates de la suspensión celular se eliminaron mediante sedimentación simple por gravedad en tubos de 15 ml con buffer fosfato salino (PBS). El pellet, conteniendo láminas de células epiteliales, fue resuspendido en medio de cultivo M199 con sales de Earle, glutamina, suero fetal bovino 10%, ácido pirúvico 0,2 mM, antibióticos y antifúngico. Se realizó una segunda purificación basada en la propiedad de los fibroblastos de adherirse a las botellas de cultivo incubando durante 2 h en estufa a 38,5 °C con 5% de CO2 y 100% de humedad, recuperando luego las células en suspensión en un tubo de 15 ml. Nuevamente se dejó sedimentar durante 5 min, transfiriéndose el pellet de células epiteliales a una nueva botella de cultivo. Luego de incubar en estufa durante 48 h, se obtuvieron explantes de células epiteliales en suspención en forma de vesículas esferoidales; éstas fueron recuperadas y mantenidas en otra botella de cultivo. Las células que quedaron adheridas inicialmente se incubaron hasta formar una monocapa con 70 ? 80%. Se obtuvieron dos modelos de cultivos que serán utilizados para estudiar la expresión de receptores de FC mediante RT-PCR.