Acción del activador del plasminógeno tipo uroquinasa en cultivos de células epiteliales del oviducto bovino

GARCÍA, DANIELA; MARIELA ROLDÁN OLARTE; AGOSTINA RUSSO MAENZA; GARCÍA, EV; PABLO A. VALDECANTOS; DORA C. MICELI

Horco Molle, Tucumán

Jornada; XXXJornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2013

Asociación de Biología de Tucumán

Los activadores del plasminógeno son serino proteasas que transforman al plasminógeno en una enzima activa: la plasmina. El activador de plasminógeno tipo uroquinasa, uPA, participa principalmente en la remodelación de la matriz extracelular y se une a su receptor, uPAR, ubicado en la membrana plasmática. Esta interacción desencadena vías de señalización intracelulares, activando importantes factores transcripcionales, como AP-1. En este trabajo se propuso detectar la presencia de uPAR en cultivos celulares de epitelio oviductal bovino y analizar el efecto de uPA estudiando los niveles de expresión de c-fos, uno de los componentes del factor de transcripción AP-1. Para ello, se realizaron cultivos tridimensionales de células epiteliales de oviductos bovinos en medio 199 suplementado con suero fetal bovino, ácido pirúvico y antibióticos. Para la detección de uPAR se emplearon alícuotas de los explantes de 48 h. Se fijaron en formaldehido al 4% tamponado, se incluyeron en paraplast y se realizaron cortes de 5 µm. Otra alícuota se utilizó para analizar la expresión de uPAR mediante RT-PCR. Además, 20 mg de explantes de 48 h se incubaron durante 0, 30, 45 y 60 min en presencia de uPA 10 nM. De estas muestras se realizó la extracción de ARN total utilizando el RNeasy Micro Kit (Qiagen) y se sintetizó ADNc. La expresión de c-fos se analizó por PCR en tiempo real utilizando GAPDH, como control de expresión constitutiva. Por inmunohistoquímica se detectó la presencia de uPAR en la región apical de las células epiteliales del oviducto, utilizando anti-uPAR humano como anticuerpo primario. También se confirmó la presencia del ARNm por RT-PCR. Mediante el análisis de la expresión de c-fos en cultivos del epitelio oviductal bovino se observó un aumento significativo a los 45 min de la inducción de los explantes con uPA. Este estudio demuestra que uPA actúa sobre las células epiteliales del oviducto, iniciando cascadas de señalización intracelulares, que involucran la activación de factores de transcripción. De este modo uPA podría regular la expresión de genes involucrados en la proliferación, adhesión celular y remodelación de la matriz extracelular.