Participación del Factor de Crecimiento de Endotelio Vascular (VEGF) en la Expresión de Componentes del Sistema de Activación del Plasminógeno en el Oviducto Bovino

AGOSTINA RUSSO MAENZA; GARCÍA, DANIELA; MARIELA ROLDÁN OLARTE

San Miguel de Tucumán

Jornada; XIV Jornadas Científicas y Encuentro de Jóvenes Investigadores ?Augusto Palavecino?; 2013

Centro Único de Estudiantes de la Fac. de Bioq. Qca. y Fcia. de la UNT

El microambiente oviductal en mamíferos provee las condiciones favorables para que ocurran los eventos iniciales de la reproducción. Citoquinas, diversas proteasas y factores de crecimiento como VEGF se expresan en el oviducto; algunas de ellas intervienen en la regulación de los cambios que ocurren en el lumen oviductal. Este trabajo se focalizó en el estudio de VEGF. Dicho factor presenta una estrecha relación con moléculas proteolíticas del Sistema de Activación del Plasminógeno, como la plasmina y los activadores del plasminógeno (APs). Los APs son proteasas que trasforman el plasminógeno a plasmina, enzima que actúa en diversos procesos biológicos. Dado que se postula que VEGF controla la expresión y actividad de uPA, se propuso analizar la expresión de uPA, su receptor uPAR y su inhibidor, PAI-I, en el oviducto bovino bajo inducción de VEGF. Se emplearon cultivos de explantes de células del epitelio oviductal; la mucosa se separó mediante presión mecánica realizando lavados con PBS a 37 °C. Luego se adicionó medio de cultivo y la suspensión se disgregó con jeringa y aguja 21G. Posteriormente se incubó a 38,5 °C, 100% de humedad y 5% de CO2. A las 48 h los explantes se distribuyeron en alícuotas de 15 μg de células por pocillo, y se adicionó VEGF 1 ng/ml o VEGF 10 ng/ml durante 0, 24 y 48 h. Las células se recogieron y procesaron para la extracción de ARN total y síntesis de ADN complementario. Mediante RT-PCR semicuantitativa se analizó la expresión de los genes y se compararon los niveles de expresión con un gen de expresión constitutiva (β-actina). En los cultivos estimulados con VEGF 10 ng/ ml se observó un aumento en la expresión de uPAR y uPA a las 24 y 48 h posteriores a la estimulación, mientras que los niveles de expresión de PAI-I, disminuyen luego de 24 h. Estos resultados indican que la adición de VEGF modifica la expresión de uPAR, uPA y PAI-I en el lumen oviductal, confirmando la estrecha relación con el Sistema de Activación de Plasminógeno.