Localización del receptor del activador del plasminógeno tipo uroquinasa en complejos cúmulo-ovocito bovinos

MARIELA ROLDÁN OLARTE; GARCÍA, DANIELA; VANESA GARCÍA; GABRIELA RIZO; DORA C. MICELI

Horco Molle, Tucumán

Jornada; XXIX Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2012

Asociación de Biología de Tucumán

El activador de plasminógeno tipo uroquinasa (uPA) es una serinoproteasa que convierte el plasminógeno en plasmina, enzima que participa en la remodelación de la matriz extracelular. Cuando se une a su receptor (uPAR), sitúa su actividad proteolítica en las proximidades de las células y activa vías de señales intracelulares. Estudios previos indican que uPA y uPAR se expresan en distintos tipos celulares del tracto reproductor femenino, indicando que estas moléculas estarían involucradas en reproducción. Con el fin de demostrar que uPA podría actuar sobre los complejos cúmulo-ovocito bovinos (COCs), el objetivo de este trabajo fue estudiar la localización y expresión de uPAR en COCs inmaduros y madurados in vitro. Se recolectaron ovarios bovinos durante la faena en frigoríficos locales y se obtuvieron COCs mediante punción/aspiración de los folículos ováricos. Se seleccionaron 240 COCs y un lote de 120 se maduró in vitro. La detección de uPAR en COCs inmaduros y madurados in vitro (MIV), se realizó mediante inmunofluorescencia indirecta y observación en microscopio confocal. Para estudiar la expresión de uPAR lotes de 50 COCs inmaduros y MIV, se trataron con hialuronidasa (1 mg/ml) a 37 °C y se separaron los ovocitos desnudos de las células foliculares. Dichas muestras fueron empleadas para la obtención de ARN total, posterior síntesis de ADN complementario y amplificación mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), usando cebadores específicos. La técnica de inmunocitoquímica permitió visualizar la presencia del receptor en células foliculares y en la membrana plasmática del ovocito, observando que la señal es más intensa en COCs inmaduros que en madurados in vitro. Mediante RT-PCR se obtuvieron fragmentos de 164 pb correspondientes a uPAR, tanto en las células foliculares como en los ovocitos provenientes de COCs inmaduros y MIV, lo que demuestra su expresión en las células analizadas. La presencia del receptor en los COCs admitiría la unión de uPA en los ovocitos y células del cúmulo, permitiendo la generación de plasmina en la superficie del gameto femenino y/o la transducción de señales intracelulares que favorezcan su maduración y fecundación.