“Expresión heteróloga in vivo del gen codificante de la proteína fluorescente verde (gfp) en células musculares de rata”

JUÁREZ, J. H.; ROLDÁN-OLARTE, E. M; VALDECANTOS, P. A.

San Miguel de Tucuman, Tucuman, Argentina

Jornada; VII Jornadas Científicas y Encuentro de Jóvenes Investigadores “Augusto Palavecino”.; 2006

Fac. de Bioq., Qca y Fcia., UNT

EXPRESIÓN HETERÓLOGA IN VIVO DEL GEN CODIFICANTE DE LA PROTEÍNA FLUORESCENTE VERDE (GFP) EN CÉLULAS MUSCULARES DE RATA   Juárez, Julián H.; Roldán-Olarte, Eugenia M; Valdecantos, Pablo A. Cátedra de Biología Celular y Molecular. Instituto de Biología. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia, UNT. Chacabuco 461. Tucumán.   EBAF/LEFTY es una proteína extracelular que pertenece a la superfamilia de factores de crecimiento transformante beta (TGF-b). EBAF es responsable de controlar una cascada de reacciones de señalización que establecen una distribución asimétrica de la expresión de genes durante la gastrulación, llevando al establecimiento morfológico de la asimetría de los órganos en un individuo. En trabajos recientes se ha demostrado que el gen lefty/ebaf se expresa en el oviducto de ratas durante la preñez temprana. Para estudiar su función nos hemos propuesto construir una proteína quimérica con el dominio activo de EBAF fusionado a la proteína fluorescente verde (GFP). En este trabajo se describen los resultados obtenidos para lograr dicho objetivo. El plásmido pEGFP-C2 cuenta con un promotor fuerte del citomegalovirus (CMV) ubicado corriente arriba del gen que codifica a GFP; un sitio de clonado múltiple y señales de poliadenilación. Este vector se propagó en la cepa de E. coli TopTen. Se analizó la expresión génica de GFP mediante transfección in vivo en músculo de rata; inyectando en el músculo cuadriceps derecho e izquierdo una solución salina de ADN plasmídico y ADN lineal respectivamente. El fragmento lineal de 1.986 pares de bases fue obtenido a partir de pEGFP-C2 mediante amplificación por PCR con cebadores específicos flanqueantes a la secuencia promotora CMV, el gen GFP y señales de poliadenilación. Se evaluó la presencia de la GFP en el músculo mediante microscopía de fluorescencia; la misma se expresó notablemente en las fibras musculares en las zonas inyectadas. Paralelamente se inició un cultivo primario de fibroblastos de conejo para continuar con los ensayos. La obtención del mismo permitirá producir la proteína quimérica y la obtención de anticuerpos al incorporar al conejo los fibroblastos transfectados ex vivo.