“Expresión del activador del plasminógeno tipo uroquinasa en el epitelio oviducal porcino in vitro. Efecto de hormonas sexuales”

NEME TAUIL, R.; ROLDÁN OLARTE, M. Y MICELI, D.

San Miguel da Tucuman, Tucuman, Argentina

Jornada; ”. IV Jornadas Científicas. Encuentro de Jóvenes Investigadores. UNT. Fac. de Bioquímica, Química y Farmacia; 2003

Fac. de Bioq., Qca. y Fcia. UNT

EXPRESIÓN DEL ACTIVADOR DE PLASMINÓGENO TIPO UROQUINASA EN EPITELIO OVIDUCAL PORCINO “IN VITRO”. EFECTO DE HORMONAS SEXUALES. Neme Tauil, Ricardo M; Roldán Olarte, E Mariela; Miceli, Dora C. Cátedra de Biología Celular. Instituto de Biología. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia. INSIBIO – UNT, Chacabuco 461, Tucumán. rmneme@hotmail.com     RESUMEN   Se conoce que las enzimas proteolíticas participan en numerosos procesos biológicos, incluyendo varias etapas de la reproducción. Los activadores del plasminógeno (APs) son serino-proteasas que transforman al plasminógeno en plasmina, la que a su vez puede actuar sobre otros sustratos, como las proteínas de la matriz extracelular. En nuestro laboratorio hemos encontrado actividad de APs en oviducto porcino, órgano en el cual ocurre la fecundación en mamíferos. Nuestros estudios demuestran que el gen del activador del plasminógeno tipo uroquinasa (uPA) se expresa en este órgano, y que los niveles de su ARNm varían durante el ciclo estral, siendo más elevados en la etapa post-ovulatoria. Con el objeto de investigar si la expresión de uPA en el epitelio oviducal varía por efecto hormonal, se diseñó una técnica de cultivo primario de células obtenidas por tratamiento enzimático del lumen del órgano. Cuatro lotes de células se cultivaron durante 7 días hasta alcanzar un 70-90% de confluencia. Uno de ellos se utilizó para demostrar la naturaleza epitelial de las células mediante la detección de citoqueratina con el anticuerpo monoclonal Anti-Pan Cytokeratin. Los lotes 2 y 3 se usaron en un experimento de estimulación con estrógeno (E) y progesterona (P) durante 24 horas. El lote 4 se empleó como control sin estimulación hormonal. La expresión del gen de uPA se estudió sobre estos tres últimos grupos por medio de RT-PCR semicuantitativa. Para comprobar que el fragmento obtenido correspondía a uPA se emplearon enzimas de restricción y amplificación a partir del ADN con el mismo par de cebadores. Los niveles de transcripción aumentaron por efecto de P, mientras que no se observaron cambios bajo estimulación con E. Esto indica que las células epiteliales de oviducto producen uPA y que el gen correspondiente está regulado positivamente por P.