“Activador del plasminógeno tipo uroquinasa en oviducto porcino: síntesis y expresión génica”.

ROLDÁN, M.; ARGAÑARAZ, M.; VALDECANTOS, P. Y MICELI, D. C.

Tafí del Valle, Tucuman, Argentina

Jornada; XIX Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2002

Asociación de Biología de Tucumán

ACTIVADOR DEL PLASMINÓGENO TIPO UROQUINASA EN OVIDUCTO PORCINO: SÍNTESIS Y EXPRESIÓN GÉNICA   Mariela Roldán, Martín Argañaraz, Pablo Valdecantos y Dora Miceli.   Instituto de Biología. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia. INSIBIO. UNT. Chacabuco 461. 4000. San Miguel de Tucumán.  micelid@unt.edu.ar     Las enzimas proteolíticas están involucradas en diferentes etapas del proceso reproductor, como la ovulación, la reacción acrosómica, la implantación del embrión. Recientemente un sistema proteolítico, el sistema de activación del plasminógeno, ha comenzado a involucrarse en la reproducción. Los activadores del plasminógeno (AP) son serino-proteasas que actúan sobre el plasminógeno, transformándolo en plasmina, la cual es también una proteasa que actúa sobre el coágulo sanguíneo y sobre una gran variedad de sustratos y tejidos, modificando la matriz extracelular. En estudios previos realizados en nuestro laboratorio se determinó la actividad de AP en oviductos de cerdas de frigorífico, en las etapas folicular y luteal del ciclo. Dicha actividad fue caracterizada como tPA (activador tisular del plasminógeno) y uPA (activador de plasminógeno tipo uroquinasa). Se encontraron diferencias en las etapas estudiadas en la actividad de estas enzimas. En el presente trabajo nuestro objetivo fue conocer si en perfundido oviducal uPA presenta variaciones durante el ciclo estral, utilizando la técnica de Western Blot. El análisis de los resultados indica la presencia de una única banda de aproximadamente 54 kDa correspondiente a uPA. La intensidad de la misma presenta variaciones, siendo mayor la concentración durante el metaestro o fase luteal temprana. A fin de confirmar si el incremento de uPA inmediatamente después de la ovulación en perfundido oviducal se debe a contaminación con fluido folicular o es resultado de la actividad de síntesis propia del tejido,  se estudió la expresión del gen de uPA mediante Northern Blot, técnica que permite detectar el ARN mensajero específico. Los resultados muestran una banda de aproximadamente 2,4 Kb que coincide con la talla del ARNm del uPA. Los resultados  correlacionados con los niveles de la b-actina, utilizado como control de expresión constitutiva, muestran una mayor transcripción después de la ovulación. Nuestros datos demuestran que uPA es sintetizado y secretado en el oviducto. Esto es particularmente interesante ya que esta molécula además de su dominio catalítico y de unión a sustrato presenta motivos de factor de crecimiento. Si se considera que el incremento de uPA se observa en etapas en que el óvulo fecundado  inicia su división embrionaria, esta molécula podría estar jugando un rol en la inducción de un ciclo celular característico, compuesto por fase S y M (mitosis) sucesivamente. El aumento en la fase posterior a la ovulación también podría estar relacionado con procesos que se llevan a cabo en el oviducto durante esta etapa, tales como la remodelación de la matriz extracelular del ovocito, la disgregación del cúmulo por acción sobre la matriz extracelular de las células foliculares y el mantenimiento de la  fluidez del medio oviducal.