“Expresión diferencial de receptores de 17  estradiol y progesteronaen oviducto de cerdo durante el ciclo estral”

PERALTA, L.; CIOCCA, D.; ROLDÁN, M. Y MICELI, D. C.

Tafi del Valle, Tucuman, Argentina

Jornada; XIII Jornadas Científicas de la Sociedad de Biología de Tucumán; 1996

Sociedad de Biología de Tucumán

DIFERENTE EXPRESIÓN DE RECEPTORES DE 17- β ESTRADIOL Y PROGESTERONA EN OVIDUCTO DE CERDO DURANTE EL CICLO ESTRAL. Luisa Peralta, Daniel Ciocca, Mariela Roldán y Dora Miceli. INSIBIO/Inst. de Biología, Fac. de Bioquímica, Química y Farmacia. Univ. Nac. de Tucumán. Chacabuco 461 (4000) S.M. de Tucumán.   Los receptores de 17 β estradiol y progesterona en oviducto de cerdo, se estudiaron mediante técnicas de inmunocitoquímica y técnicas bioquímicas de binding usando hormonas marcadas y realizando el desplazamiento mediante las correspondientes hormonas frías. Los oviductos se clasificaron en dos lotes de acuerdo al aspecto macroscópico de los ovarios: a) fase estrogénica y b) fase luteal. En todos los casos se trabajó con la región de ámpula. Para los estudios inmunocitoquímicos el tejido fue fijado en formol al 10% en PBS., inmediatamente después de sacrificado el animal. El anticuerpo antireceptor de estrógeno usado fue ID5 (Dako Corp.,U.S.A) y el antireceptor de progesterona fue el MPRI (Trans Bio, Francia). Para el estudio bioquímico se separaron las fracciones nuclear, citosólica  y microsomal por centrifugación diferencial. Además se obtuvo una fracción enriquecida en membrana plasmática, a partir de células epiteliales, mediante ultracentrifugación en gradiente de sacarosa al 41%, la que fue testeada al microscopio electrónico y por marcadores enzimáticos. Se realizaron los estudios de binding, en todas las fracciones obtenidas, con H3 estradiol (170 Ci/mmol) y el análogo de progesterona H3 R5020 (1 mCi/ml). Para el desplazamiento se utilizaron concentraciones 200 veces superior de estradiol y R5020 fríos respectivamente. Se ajustaron condiciones de pH, temperatura y tiempo de incubación a fin de lograr el mayor binding específico. Mediante inmunofluorescencia indirecta en cortes de tejido, se observó que los receptores de estrógeno se ubican preferentemente en el estroma oviducal tanto en fase estrogénica como luteal. En cambio los receptores de progesterona se ubican en células epiteliales sólo en fase luteal. Esto se correlaciona con los resultados obtenidos por la técnica bioquímica de binding ya que se detectaron sitios de unión específica para 17 β estradiol sólo en citosol mientras que la progesterona muestra mayor binding específico en fracción de membranas.