“Expresión del gen del receptor de membrana de progesterona en oviducto de cerdo”.

ARGAÑARAZ, M.; ROLDÁN, M. Y MICELI, D. C.

Tafí del Valle, Tucuman, Argentina

Jornada; XVIII Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2001

Asociación de Biología de Tucumán

Argañaraz M. E., Roldán E. M., Miceli D.C.    Dep. Biología del Desarrollo, INSIBIO, Insto de Biología, Fac. BQCA. QCA. y FCIA. ( Chacabuco 461. S.M. de Tucumán (C.P. 4000). micelid@unt.edu.ar   Las hormonas esteroideas actúan modulando la transcripción nuclear y la síntesis de proteínas a través de receptores nucleares, induciendo la síntesis de proteínas involucradas en el efecto fisiológico de las hormonas. Pero también actúan a través de receptores de membrana específicos que desencadenan efectos rápidos mediante activación de segundos mensajeros. En el oviducto de cerdo se conoce que las hormonas esteroides pueden actuar a través de efectos genómico y/o extragenómico para cumplir sus funciones específicas. Algunas de estas son proveer un ambiente apto para el transporte de los gametos, la capacitación espermática, la fertilización y los primeros estadios de la embriogénesis, Ya que gran parte de estos procesos están regulados por la progesterona resulta importante investigar cuales son los mecanismos moleculares involucrados en dicha regulación, propósito general del proyecto en el que se desarrolla este trabajo cuyo objetivo especifico fue determinar la expresión del gen del receptor de membrana de progesterona en el oviducto de cerdo. Los oviductos se obtuvieron de animales de frigorífico, clasificándolos en distintos estadios del ciclo estral según la morfología del ovario. Luego de realizar la extracción y purificación del ARN empleando el SV Total RNA Isolation System (PROMEGA), se llevaron a cabo protocolos. de RT -PCR (reacción de PCR acoplada a transcripción reversa) con cebadores específicos diseñados a partir de secuencias nucleotídícas de dicho receptor publicadas en la base de datos del NCBI (National Center for Biotechnology Information). Los productos de amplificación obtenidos se identificaron por electroforesis en geles de agarosa, observándose una sola banda correspondiente al producto específico de amplificación de dichos cebadores. Los resultados obtenidos indican que el gen del receptor de membrana de progesterona se expresa en oviducto de cerdo durante todo los estadios del ciclo sexual. No se observan diferencias cuantitativas cuando se usa como standard o control de expresión constitutiva cebadores de la b-actina. Sin embargo en nuestro laboratorio se detectaron diferencias en la capacidad de unión de progesterona a fracción de membranas en diferentes estadios del ciclo sexual indicando la presencia de mayor cantidad de receptores o la activación de ellos en determinadas condiciones hormonales. Ya que: i) los resultados se expresan mediante un índice que indica la concentración relativa de un gen con respecto al control y que ii) la actina usada como control también está involucrada, al igual que los receptores de membrana, en los fenómenos de respuesta celular, se piensa que quizás las diferencias de expresión del receptor de progesterona en los distintos estadios del ciclo estén enmascaradas debido a una correlación con la diferente expresión del gen de la actina. Por ello se propone usar la expresión de otro gen constitutivo para estudiar si durante el ciclo sexual la regulación de la progesterona a través de sus receptores de membranas es transcripcional o postranscripcional.