INVESTIGADORES
ROLDAN OLARTE Eugenia Mariela
congresos y reuniones científicas
Título:
“Detección del receptor del activador del plasminógeno tipo uroquinasa (u-PAR) en ovocito y oviducto porcino”
Autor/es:
ROLDÁN-OLARTE, M.; JIMÉNEZ-DÍAZ, M.; GARCÍA, D. Y MICELI, D. C.
Lugar:
Tafi del Valle, Tucuman, Argentina
Reunión:
Jornada; XXIII Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2006
Institución organizadora:
Asociación de Biología de Tucumán
Resumen:
DETECCIÓN DEL RECEPTOR DEL ACTIVADOR DEL PLASMINÓGENO TIPO UROQUINASA (U-PAR) EN OVOCITO Y OVIDUCTO PORCINO.   Roldán-Olarte, Mariela; Jiménez-Díaz, María; García, Daniela y Miceli, Dora C. Departamento de Biología del Desarrollo- INSIBIO; Fac. De Bioq., Qca. y Fcia. UNT. Chacabuco 461. San Miguel de Tucumán CP: 4000.                 El sistema de Activación del Plasminógeno es un sistema proteolítico que participa en diferentes procesos fisiológicos y patológicos, tales como la fibrinólisis, el mantenimiento de la fluidez en estructuras tubulares, el procesamiento de factores de crecimiento, la inflamación, la angiogénesis y procesos neoplásicos, entre otros. Existen fuertes evidencias que involucran a los componentes de este sistema en diferentes etapas del proceso reproductor, por ejemplo, en la ovulación e implantación del embrión. En nuestro laboratorio hemos demostrado que el oviducto porcino sintetiza algunas de las proteínas que forman parte de él, los activadores del plasminógeno (APs). Estas moléculas son enzimas proteolíticas de alta especificidad que transforman al plasminógeno en plasmina, la cual cliva un amplio espectro de otras proteínas. Se conocen dos tipos de APs: el tipo tisular (t-PA) y el tipo uroquinasa (u-PA). Uno de ellos, u-PA, posee un receptor situado en la membrana plasmática de diferentes tipos celulares (u-PAR). Esta molécula localiza a u-PA en discretas áreas de la superficie celular. Cuando u-PA está unido a u-PAR permite que el plasminógeno se active en determinados puntos cerca de la membrana plasmática, donde también puede unirse el plasminógeno. Por otro lado, existen numerosos trabajos que indican que la unión de u-PA a u-PAR activa cascadas de transducción de señales intracelulares, iniciadas por la fosforilación de tirosin-quinasas. Dada la importancia de esta molécula en diferentes procesos biológicos, el objetivo de este trabajo fue analizar la presencia de u-PAR en el ovocito porcino y el oviducto. Para ello se utilizaron complejos cúmulo-ovocito inmaduros (COCs) obtenidos de ovarios de cerdas recientemente faenadas, por aspiración de los folículos ováricos. Luego de seleccionaron los COCs bajo lupa, se fijaron en paraformaldehído al 4%. Se empleó la técnica de inmunofluorescencia indirecta, utilizando para ello un anticuerpo primario anti u-PAR humano (policlonal) y se reveló mediante un anticuerpo secundario marcado con y luego extravidina-FITC. Los resultados muestran una intensa fluorescencia sobre la superficie del ovocito, mientras que la zona pelúcida no presenta reacción positiva. También se analizaron oviductos porcinos. Los mismos fueron obtenidos durante la faena, lavados con PBS y fijados inmediatamente en formaldehído al 4%, en PBS. Luego se analizaron mediante inmunohistoquímica indirecta, con el fin de detectar la presencia de u-PAR. Se observó una reacción positiva en el epitelio del oviducto, no así en el tejido conectivo subyacente. Estos resultados sugieren que probablemente u-PA podría ejercer un efecto de activación del plasminógeno cercana a la superficie del ovocito, ya que en trabajos anteriores también demostramos la presencia de plasminógeno en el ovocito. La presencia de u-PAR en el epitelio oviducal también sugiere que u-PA, que está presente en el fluido oviducal, se uniría a su receptor y generaría la formación de plasmina en la superficie del epitelio, como también que la unión u-PA/u-PAR podría generar señales intracelulares hacia el interior del oviducto, importantes para la función oviducal.